从零开始学PCR技术（一）：PCR技术简介

PCR 可能是分子生物学中使用最广泛的技术。虽然我本科学的是生物科学，提过 DNA，也跑过 PCR，但现在都快忘了 PCR 的步骤是三个还是四个了。赶快网络搜索之，整理成一个从零开始学系列。

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一项利用 DNA 双链复制原理，在生物体外复制特定 DNA 片段的的核酸合成技术。可在短时间内大量扩增目的 DNA 片段，而不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。

DNA 的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链 DNA 在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在 DNA 聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA 在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制 DNA 的变性和复性，加入设计引物，DNA 聚合酶，dNTP 就可以完成特定基因的体外复制，这是 PCR 的理论基础。

一、反应体系

PCR 反应是在体外模拟 DNA 的复制过程，因此反应体系中必须具有 DNA 复制所需的基本要素：

1. 模板（template），含有需要扩增的 DNA 片段。

2. 引物（primer），一对引物决定了需要扩增的起始和终止位置。

3. 聚合酶（polymerase ），DNA 聚合酶复制需要扩增的区域。

4. 脱氧核苷三磷酸（dNTP），用于构造新的互补链。

5. 缓冲液（buffer），提供适合聚合酶行使功能的化学环境。

二、反应步骤

标准 PCR 过程分为三步：

1. 变性（Denaturation）：利用高温使 DNA 双链分离。DNA 双链之间的氢键在高温下（93 - 98℃）被打断。

2. 退火（Annealing）：在 DNA 双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链 DNA 上。

3. 延伸（Extension）：DNA 聚合酶由降温时结合上的引物处开始沿着 DNA 链合成互补链。延伸完成，则完成一轮循环，DNA 片段数增加一倍。往复循环这三个步骤 25-35 次，DNA 片段数将得到指数级增加。