RIP实验步骤(RNA Immunoprecipitation)

 RIP 技术用于定位体内的RNA-蛋白质相互作用。将所关注的RNA结合蛋白(RBP)与其结合的RNA一起进行免疫沉淀，鉴定结合转录RNA（mRNA、非编码 RNA或病毒RNA）。可以通过实时PCR、微阵列或测序检测。

RIP实验步骤：

一、裂解样本

1. 细胞生长约90%覆盖度，细胞计数，收件约1× 10 ^7细胞；

2. 1000 ×g，4 °C离心5min，弃上清；

3. 用1× 预冷PBS洗两遍，弃上清；

4. 用等体积的1×PLB裂解液重悬细胞，轻轻吹散，冰浴5min；

5. −80 °C冻存，样品也可以在−80 °C放置数月。

二、磁珠-抗体复合物制备

1.    振荡混匀Protein A/G琼脂糖珠，根据样本数各吸取40ul到1.5mL离心管中；用0.5ml NT-2洗涤两遍。

2.    用100ul NT-2重悬