RNA 提取步骤（trizol）

1. 样本前处理

  a.组织样本:取50~100mg组织样本（黄豆粒大小，若是脂肪组织则需要增加样本量）用液氮研磨至粉末状，转到装有1mL trizol的 1.5 mL RNase-free离心管中，震荡混匀。

  b.细胞样本：吸干培养基上去，按1mL trizol/10cm²培养皿的比例加入trizol，并用移液枪吹打数次直至细胞被完全裂解下来。

2.室温静置5min，让RNA可以充分释放。

3.按 1 mL Trizol 加入 200 μL 氯仿，盖好管盖（注意：此次一定要盖好盖子，避免震荡过程中液体渗出）。用手剧烈震荡 15 s，室温放置 3 min；

4.12000 g、4℃离心 15 min；（离心后样本会分三层，最上层是透明的水相，RNA溶在水相中）

5.小心转移上清液（约500 μL）至新的 1.5 mL 无酶离心管中；

6.加入等体积异丙醇，室温静置10min；（若预期RNA量比较少，可加入适量糖原，并于-20℃或-80℃沉淀 过夜；）

7.12000 g、4℃离心 10 min；弃掉上清，保留沉淀；

8.加入 1 mL 75％乙醇，涡旋或颠倒混匀；

9.7500 g、4℃离心 5 min；弃掉上清。

10.7500 g、4℃离心 30s；用10ul小枪头尽量吸掉残留的液体。

11.室温静置5~10min，晾干乙醇。（看到RNA变半透明即可）

12.加入适量RNase-free水溶解RNA,室温静置10min；令RNA可以充分溶解。

13.分装少量RNA，剩余RNA冻存到-80℃冰箱备用。