Western Blot 内参蛋白选择指南

在 Western Blot（WB）实验中，内参蛋白的选择直接影响结果的可靠性与重复性。内参蛋白作为 "实验标尺"，需在不同处理条件（如药物干预、缺氧刺激、培养基更换等）下保持稳定表达，其核心功能是校准样本上样量差异、电泳转膜效率差异及抗体孵育一致性。本文将从样本类型和亚细胞定位出发，系统梳理各类场景下的内参蛋白选择策略，助力 WB 实验结果的精准分析。

一、全细胞蛋白内参：通用场景的基础选择

全细胞样本包含胞质、胞核、膜结构等多种组分，内参需在整体细胞中表达稳定，且不受常见实验处理的干扰。

• β-actin
  分子量约 42kDa，作为细胞骨架的核心成分，在多数真核细胞中呈 constitutive 表达。优势在于适用范围广，尤其适合全细胞和细胞质样本的校准。注意事项：在脂肪组织、肌肉组织实验中需谨慎选择，因这类组织的细胞结构特殊，可能导致 β-actin 表达波动。

• GAPDH
  分子量约 36kDa，作为糖酵解途径的关键酶，在多数细胞中表达量高且稳定性强。局限性：在涉及能量代谢异常的实验模型（如缺氧、糖尿病模型、细胞能量应激实验）中不适用，其表达会随代谢状态变化而波动。

• α-tubulin/β-tubulin
  分子量约 55kDa，是构成微管的核心结构蛋白，适用于多数细胞和组织样本。规避场景：细胞周期研究、抗有丝分裂药物（如秋水仙素）处理实验中需避免使用，因微管的动态组装 / 解聚会显著影响其表达稳定性。

• Vinculin
  分子量约 117kDa，作为黏着斑相关蛋白，在多种细胞中分布广泛且表达稳定。优势场景：研究细胞黏附、迁移相关实验时，Vinculin 的表达特性使其成为理想内参，可与实验目标蛋白（如整合素、黏附分子）形成更匹配的校准体系。