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俗话说,一个生物学博士,要跑满1000面胶才能毕业。今天特邀实验室博三大师兄,和大家聊一聊WB内参那些小事。
选择好合适并且好跑的内参,WB实验也就成功了一半。
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1. 什么是内参?
内参即内部参照,一般是指由管家基因编码表达的蛋白,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物
2. 内参的作用是什么?
(1)校正蛋白样品定量以及上样过程中的误差,保证实验结果的准确性
(2)作为空白对照,检测WB过程中蛋白转膜是否完全以及发光显色体系是否正常
3. 如何选择内参?
(1)根据样本的种属来源选择,如哺乳动物或者植物等
(2)考虑目的蛋白的分子量大小,一般需要与目的蛋白的分子量相差5kd以上
(3)根据蛋白表