干货！免疫组化（IHC）相关常见问题及解析合集

免疫组织化学（简称免疫组化）是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。

       实验过程包括切片制作（固定，脱水，透明，包埋，切片，贴片，烤片），脱蜡，水化，阻断，抗原修复，封闭，一抗孵育，二抗孵育，显色，复染，封片，分析。

       实验过程常见问题如检测结果阴性，非特异性染色，染色强度不够，着色不均，脱片，干片等。一起来看案例解析，助您高效做出准确实验结果。

 

 

1 标本的固定

 

常见问题：

 

组织固定不及时或不完全固定,HE染色细胞核发灰模糊，对比不鲜明；免疫组化染色结果不理想，通常组织离体2h后抗原完全丢失。

 

 

01

范例1

 

检测组织：人淋巴结组织石蜡切片

检测：CD45染色

问题：组织固定不充分，淋巴结边缘淋巴细胞CD45染色强阳性，组织内部淋巴细胞CD45染色弱阳性，染色不均。

 

02

范例2

 

检测组织：肾脏组织石蜡切片

检测：HE染色

问题：固定不及时或固定不完全，细胞核模糊，对比不鲜明。

 

建议：

1、组织离体后尽快固定，组织块大小为15×15×5mm，切开固定效果好；

2、固定液以10％中性福尔马林缓冲液为佳；

3、固定时间在4h-24h之间，长时间固定会影响抗原决定簇的暴露，产生阴性结果；

4、固定液的量要超过组织体积5倍以上。

 

 

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