WB, IHC实验问题总结与处理方案

1、western blot 的优点

答： 灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。

 

2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白？

答： 原因有很多：

a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；

b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；

c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。

 

3、我的细胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢？

答： a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长， b) 也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量上样缓冲液即可。

 

4、我做的蛋白质分子量很小（10KD），请问怎么做WB？

答：可以选择0.2μml的膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。其他按步骤即可。

 

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