单细胞测序系列之一：测序技术的发展

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1 引言

图1 核酸测序技术的发展历史

  生命的秘密藏在DNA的A、C、G、T四种碱基的排列组合之中，而解密生命的首要任务，就是要确定DNA的序列。

  核酸测序技术是20世纪生物学研究中最重要的发明之一，极大的推动了生物科学的发展¹。基于核酸测序技术之上的人类基因组计划（Human Genome Project，HGP），和曼哈顿原子弹计划和阿波罗登月计划一起，被称为人类科技史上彻底改变世界的三大工程²。人类基因组测序计划对生命科学和医学等相关的研究有着直接的促进作用，也为人类的健康和生存提供了重要的基础。同时，在HGP的基础上，后续的各种基因组学、转录组学、表观基因组学、生物信息学等各个领域的研究也得到了极大的发展。

2 第一代测序技术

  1968年，吴瑞先生提出了第一个DNA组成的测定方法³，1970年，吴瑞先生将引物延伸（primer extension）用于DNA测序,开了DNA测序的先河，并成为了后续的Sanger测序法的重要基础⁴。可以说，吴瑞先生是当之无愧的DNA测序之父。饶毅老师的博文《君子爱“生” 得之有道》⁵中更是写道：“1971年吴瑞的引物延伸，是测序的一个关键步骤，给奖是可以的”(这里指诺贝尔化学奖)。

  1975年，Sanger在吴瑞的引物延伸测序技术的基础上，发表了自己的DNA测序方法⁶，1977年Gilbert等人建立了化学裂解法⁷，同一年，Sanger也发表文章改进了自己之前的测序方法，正式确立了目前第一代测序的主流方法-双脱氧链终止法（Sanger测序法）⁸。这项工作也使Sanger和Gilbert等获得了1980年的诺贝尔化学奖，值得一提的是，1958年Sanger就因完成了胰岛素化学结构的测定获得了当年的诺贝尔化学奖，是目前为止唯一一位两次获得化学奖的科学家。

  Sanger测序的原理参见图二：

• 使用DNA聚合酶延伸结合在待定序列模板上的引物，直到掺入一种链终止核苷酸为止。
• 每一次序列的测定由四管单独的反应构成，每个反应中含有所有的四种脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate，dNTP），并混入了一定量的双脱氧