如何快速构建自己想要的目的质粒

1、在snapgene打开载体序列，找到酶切位点。

2、打开NEB网址：https://international.neb.com/tools-and-resources

3、打开Tools & Resources----NEB Builder Assembly Tool:http://nebuilder.neb.com/

4、点击“Build Construct”。

5、点击“ADD FRAGMENT”。

6、把snapgene上的载体序列粘在sequence上，sequence name写类似于“pAUR123”。

7、在“make this the vector”后打钩。

8、点击“continue”。

9、点击“Restriction Digest”，选择5’段端的酶为“KpnI”、3’端的酶为“XhoI”，点击“Regeneration”，“Done”。

10、点击“ADD FRAGMENT”。

11、将目的片段复制过来。这里复制了pIGF1。

12、将名字写上去，点击“continue”，点击“PCR”，“DONE”。

13、点击“Get assembly”,将序列复制到snapgene，建一个新文件，命名为“pAUR123-pIGF1.dna”，点击“OK”,点击“Add 7 features”。

14、这样就有构建好的质粒序列啦，然后酌情在目的片段前后加上起始密码子“atg”和终止密码子“tag”，还可以加上标签蛋白序列。

15、将NEB网址上的引物通过“add primers”复制到SNAPGENE上来,上链命名为“pAUR123-pIGF1-KpnI-F”，后导链命名为“pAUR-pIGF1-XhoI-R”。点击“Add primers to template”。

16、在Prime primier中设计检测引物与送测引物，一起发给引物合成公司。