snapgene设计引物_snapgene使用

1. 基因标注：先选中相应序列，feature>add feature

2. 选择质粒图谱和目的基因比对，查找相同的酶切位点，进行目的基因的导入选择

3. DNA序列翻译成蛋白质序列

   DNA序列获取：NCBI，导入snapgene，蛋白质序列获取：ncbi，genebank，复制，snapgene，ctrl+F，粘贴，查找，标注特征

4. 新冠设计引物：

5. NCBI gene，输入序列号：43740568

   

6. 鼠标放置于箭头处，点击fastaview，选中复制，粘贴到文本框里，snapgene打开

7. 质粒载体，打开snapgene官网，resources>plasmid files>search>pet-32a

8. 查找不可以切割目的基因的多克隆位点：enzymes>noncutters,查找可以切割质粒载体多克隆位点的酶，两种限制性内切酶必须在同一种内切buffer中活性超过50%

   

   

   完整的引物序列=保护碱基+酶切位点+上游引物序列  5’-3’

   上游引物：从头选25个复制贴到文本框中,尾部25个反向互补

   (在线退火温度计算器：biolab)

9. 模拟核算电泳：tools>simulate agarose gel

10. 复制5-3的上游引物：Ctrl+c，复制5-3的下游引物：Ctrl+shift+c

11. 插入片段：actions>restriction and insertion cloning>insert fragment