SnapGene如何设计sgRNA，构建载体，对靶基因进行敲除

最新推荐文章于 2023-04-23 10:56:43 发布
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随着CRISPR/Cas9技术的普及，单基因乃至单碱基的基因编辑已经逐渐成为实验室日常的技术体系。本文检验介绍如何使用最简单的方法对某一因进行基因敲除。

 

 

面将以小鼠Mafb基因为例进行操作示范。

 

首先第一步时进行基因序列的获取，使用UCSC基因组浏览器找到Mafb的基因，

640.jpeg

 

观察所需的基因信息,该基因只有一个外显子，并且位于负链的基因（转录方向为反向）

640 (1).jpeg

由于CIRSPR敲除机制的限制，在这里我们需要在含有CDS的第一个外显子的CDS区设计sgRNA，并且不能跨外显子。我们首先需要将基因信息复制到本地，建议保存到snapgene中进行后续操作。获取基因的方法使用UCSC的get gene 

 

 

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