Fura Red AM，Cell Permeant钙离子探针使用说明

一、试剂描述

Fura Red是一种可见光激发的Fura-2类似物，与单波长激发、绿色荧光的钙离子探针（比如：Fluo-8）联合使用时，可通过显微光度术、成像来比率法测定单细胞内的Ca2+水平。

Fura Red，AM是Fura Red的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，简单培养后，便可轻易进入细胞。

进入细胞内会被内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura Red，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

Fura Red，AM能够与Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等同时加载进入细胞。两种钙离子探针结合使用，可以用长激发波长。

比起传统的紫外或近紫外激发的比率型探针，对细胞造成的伤害变小。

二、物理参数

【英文名称】：Fura Red，AM，Cell Permeant

【中文名称】：钙离子荧光探针FURA RED，AM

【CAS NO】：149732-62-7

【分子式】：C47H52N4O24S

【分子量】：1088.99

【状态】：红棕色结晶性粉末

【Ex/Em】：471/652 nm（Ca2+-free），436/630 nm（Ca2+-bound）

【溶解性】：溶于DMSO（5mM）

【纯度】：≥95%

【储存条件】：-20℃避光干燥

三、使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末中加入500μl DMSO，配制成20%DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B， 操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura Red, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura Red, AM储存液取出于室温回温。

2） 准备Fura Red, AM工作液之前，有时需要往Fura Red, AM储存液中加入20% Pluronic F-127溶液，可增强AM探针的水溶性。

3） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura Red, AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

4） 如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒或磺吡酮可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

5） 将准备好的Fura Red, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

6） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

7） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM去酯化。

8） 可用激发/发射波长来检测荧光。

四、试剂结构

五、注意事项

（1）荧光染料存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

（2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

（3）Fura Red, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

（4） Fura Red, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

（5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

六、相关试剂

Enhanced Potassium Green-4 AM

BODIPY 505/515，CAS：21658-70-8

脂膜荧光探针C-Laurdan，959839-06-6

Cal-520 Potassium Salt，钙离子荧光探针

DAF-FM DA-氧化氮荧光探针，254109-22-3

Cal-630 Potassium Salt钙离子荧光探针

Cal-520 AM，Cell Permeant钙离子荧光探针

Cal-590 AM，Cell Permeant钙离子荧光探针

Cal-630 AM，Cell Permeant钙离子荧光探针

Fluo-4，AM，Cell Permeant钙离子荧光探针

Fluo-8，AM，Cell Permeant钙离子荧光探针

Rhod-2，AM，Cell Permeant钙离子荧光探针

Rhod-4，AM，Cell Permeant钙离子荧光探针

本文章（以上资料）由西安强化生物科技xxn编写！

特别提示：该试剂仅供科研机构实验室使用，严禁用于临床诊疗及食品领域！