2023.03.22文献阅读

文献题目：Enhancement of extraplastidic oil synthesis in Chlamydomonas reinhardtii using a type-2 diacylglycerol acyltransferase with a phosphorus starvation–inducible promoter

这篇文章使用了一种基于磷缺乏条件下的油脂合成的微藻的实验方法，利用一种二酰基甘油酰基转移酶（DGTT4）来增加细胞质中的油滴的形成和三酰甘油（TAG）的积累。这种方法使用了一种在磷缺乏时上调的硫醌新酰二酰基甘油2（SQD2）启动子来控制DGTT4的过表达。这种方法在磷缺乏条件下实现了比野生型更高的TAG含量和产量。

与之前的方法相比，他们的解决方案的优势是，它利用了磷缺乏这一环境压力来诱导油脂合成，而不是氮缺乏。磷缺乏可以维持叶绿体膜的完整性，而氮缺乏会导致叶绿体膜的降解。因此，磷缺乏可以保持光合作用的效率，同时增加油脂合成的能力。他们解决了之前方法无法解决的问题是，如何在不影响光合作用的情况下提高微藻的油脂产量。

他们的方法的主要步骤如下：

从C. reinhardtii中克隆DGTT4基因，并将其插入到SQD2启动子下游，构建一个P依赖性过表达DGTT4的载体。
将该载体转化到C. reinhardtii野生型中，筛选出稳定转化的株系。
将转化株系和野生型分别在含有或不含有磷的培养基中培养，并测定它们的生长曲线、TAG含量、TAG组成和脂滴形态。
使用液相色谱-质谱联用（LC-MS）分析转化株系和野生型在磷缺乏条件下的代谢物组成，以探究DGTT4过表达对油脂合成途径和其他代谢途径的影响。
使用实时定量PCR（qPCR）分析转化株系和野生型在磷缺乏条件下的基因表达水平，以探究DGTT4过表达对油脂合成相关基因和其他基因的调控作用。

这个启动子在正常条件下的表达水平很低，但是在磷饥饿条件下会显著上调12。这个启动子是控制硫醇脂二酰甘油合成的关键基因SQD2的启动子。这个启动子不是作者首次发现的。SQD2是一种硫醇脂二酰甘油合成酶，它的启动子在水稻中已经被报道过，并且在另一种微藻Nannochloropsis中也被利用过。

这篇文章的主要结论是：利用一个磷饥饿诱导的启动子过表达一种二酰甘油酰基转移酶（DGTT4）可以在磷饥饿条件下增加微藻Chlamydomonas reinhardtii的细胞外油脂合成，而且不影响叶绿体膜的稳定性123。这为利用微藻生产生物柴油提供了一种新的策略。