荧光底物和化学发光底物的介绍（腔肠素/腔肠素-H/BZiPAR/Z-FR-R110）

荧光底物

与色原底物相比,荧光底物检测灵敏度高,而且可以同时采用几种不同颜色的荧光材料;但是荧光底物存在以下缺点:激发和检测荧光需要价格昂贵的光源、过滤器和扫描仪，检测成本高;荧光在观测期间或样品存放期间、甚至暴露于室内光线时都会衰减,导致难以获得恒定值或定量数据;另外从细胞和其他分子里产生的自发荧光(在许多活体中天然存在的某些特定化合物产生的荧光)也会对实验结果产生干扰。

常规的荧光材料难以直接用作HRP底物,但是它们与酪胺[4一(2-氨乙基)–苯酚]耦联后却可以在HRP作用下发生沉积。这种基于酪胺的荧光色素沉积技术的正式名称叫催化报道分子沉积( catalyzed reporter deposition , CARD) ,或者酪胺信号放大( tyramine signal amplification , TSA)。该技术是由Bobrow 等3于1989年首次提出的,其应用范围开始仅限于免疫印迹和ELISA分析,后来则延伸到免疫组化、原位杂交等诸多领域,在基于酶的灵敏检测中得到广泛的应用。

与CARD中荧光分子只有通过与酪胺形成复合物才能被HRP催化沉积不同, Krieg 等”合成了一类2-(2-苯乙烯基)-苯并噻唑衍生物,这类化合物可以作为新型荧光底物直接用于HRP的活性定位,其基本结构式见图1。经过优化筛选,其中(E)-2-2-[4-羟苯基]乙烯基-3-乙基-1 ,3-苯并噻唑碘化物的效果最好,与Alexa荧光素546-酪胺偶合物相比,这种新型的底物荧光染色特异性强、灵敏度高.背景低。总之,通过将苯乙烯基苯并噻唑衍生物进行酶交联从而在 HRP活性位点附近产生多重荧光色素,是一种可以替代荧光染料标记酪胺沉积技术的很有前景的方法。