合成基因的方式

 

合成基因 的方式有 2 种

①     全基因合成 ：

一般对于分子较小而又不易得到的基因采用该方式。可将双链基因分成若干 寡核苷酸 单链片段 ( 尤其待合成基在在 100 个核苷酸以上时 ) ，每个片段长度控制在 40-60 个碱基，并使每对相邻互补的片段之间有 6 个碱基交叉重叠。在体外 将除基因两端末端外的所有片段磷酸化。混合退火后加入 DNA 连接酶，即可得到较大的基因片段。如果需连接 亚克隆 的方法，最后将亚克隆的较大片段重组为完整的基因。采用分步 连接、亚克隆的方法时，为便于亚克隆中回收基因片段。应在片段两侧设计合适的酶切位点，由于每个亚克隆可以分别鉴定，从而可减少顺序错误的可能性。

②     酶促合成：

此法又称基因的半合成。 全基因 ，特别是较大的基因的全部化学合成成本昂贵，使用半合成的方法可以降低成本，从而利于普及使用。首先合成末端之间有 10-14 个互补碱基的寡核苷酸片段，退火后以重叠区作为引物，在 4 种 dNTP 存在的条件下，通过 DNA 聚合酶 I 大片段 (Klenow 酶 ) 或反转录酶的作用，获得两条完整的互补双链。在合成基因的结构中，应包括有克隆和表达所需要的全部信号及 DNA 顺 序， 基因密码 的阅读框架也应该同表达体系相适应。此外，由于不同种类的生物体或密码子的使用都具有明显的选择性，在 基因合成 和克隆时必须考虑这个问题。选 择合适的密码子，以获得高效表达。