使用image Pro plus 6.0分析细胞油红O染色结果计数/计算面积百分比

前言

自己做实验需要给细胞脂滴染色，在网上找资料摸索找到的一些内容，能够快速方便的计算油红O染色后的脂滴数量以及占面积百分比，简单总结一下，如果有问题或者建议欢迎一起交流学习~

油红O染色简单步骤

我自己这次使用的六孔板，第一次做乳腺上皮细胞，直接用的师兄给的油红O染液（结果工作液状态太久可能失效了，也可能是细胞本身原因脂滴分泌不明显），实验失败了，但还是练手了后面分析过程记录下来

染色步骤：参考细胞油红o染色

• 用枪头吸出培养液，加入2mL PBS轻轻晃动漂洗，吸出PBS弃掉
• 每孔加入2mL 95%酒精（使用多聚甲醛固定更好，我直接用的细胞间现成的酒精），固定30min，固定的是细胞膜（吸一个孔加一个孔，防止孔内变干，脂滴破裂）
• 固定过程中准备染色液：将【油红储存液：去离子水=3:2稀释】（储存液为：0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存），这次使用的为师兄已经配制好的工作液，无需稀释，直接用0.45μm滤器过滤（细胞间滤器好找，滤纸不方便，开头试了70μm细胞滤网发现不行，还是有沉淀）滤至15mL离心管内，备用（过滤是为了防止油红染料颗粒污染背景，看起来脏）
• 吸出95%酒精固定液，每个孔加入1mL染色液（吸一个孔加一个孔），室温染色15min左右

苏木精复染步骤

• 染色完成后，60%异丙醇漂洗，每孔2mL，除去多余染料以及背景残留（调色，可显微镜下观察用60%异丙醇浸染到细胞质胞浆无色即可）
• 取1mL苏木精染料复染5min左右，条件有限的话油红染料和苏木精染料都可回收使用

脱色步骤

• 使用60%异丙醇漂洗或者75%酒精或者PBS漂洗都可以
• 我使用的六孔板，不需要长期保存，做完就扔，也就不需要像传统切片一样甘油封片
• 显微镜观察

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使用image Pro plus 6.0分析油红染色

• 双击打开软件选择Complete
  

• 导入染完色拍到的图片，我这里因为之前说了失败了，就在网上找了下面张做演示
  在这里插入图片描述

• 点击计数和测量对象，弹出如下对话框
  

• 在弹出对话框中选择如下Automatic Bright Objects，然后点击Measure项中选择Select Measurements
  

• 在弹出的Select Measurements对话框中选择Per Area（Obj./Total）后单击OK
  

• 回到Count/Size界面后选择Manual，然后点击后面的Select Colors…选项
  

• 在弹出的Segmentation对话框中选择Color Cube Based选项，接着点击取色器标识，将鼠标移到导入图片的红色脂滴上，选取红色（如果你要计数其他颜色同理），此时导入的图片上相同颜色都会被高亮显示（按需选取颜色直至大部分脂滴被标记上），接着点击Close关闭对话框
  

• 在该对话框中点击Count计数
  
  

• 接着点击View下的Statistic
  

• 即能看到分析结果
  

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参考资料:
细胞油红o染色
实验必备技能，一看就会的油红染色指南