南瓜子抑制5α还原酶_Molecular Cell | 植物在低氧环境中GSNO还原酶通过亚硝基化发生选择性自噬...

2018年5月，MolecularCell杂志发表了中国农业科学院研究所左健儒课题组的研究论文“S-Nitrosylation Targets GSNO Reductase forSelective Autophagy during Hypoxia Responses in Plant ”。该研究发现植物在低氧环境中GSNO还原酶通过亚硝基化发生选择性自噬。

S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)是一种重要的生物活性的NO，其细胞内水平受GSNO还原酶(GSNOR)的调控。然而，关于GSNOR的活性是如何被调节的却知之甚少。该研究发现存在NO的时候GSNOR1在Cys-10上的S-亚硝基化反应引起其局部构象变化，暴露了其ATG8相互作用基序(AIM)，从而导致GSNOR1选择性自噬。GSNOR1的S-亚硝基化调控选择性自噬与缺氧反应有生理相关性。

通过质谱分析和生物素转换方法证明GSNOR在第10位半胱氨酸和370位半胱氨酸发生亚硝基化，同时将第10位半胱氨酸突变为丝氨酸，DAN-NAT转化率降低了31%，相当于损失一个S-亚硝基残基。这些结果表明Cys-10在植物体内是S-亚硝基化的。

实验证明，NO供体硝普钠(SNP)减少了GSNOR1的积累，利用NO清除剂处理后，nox1(NO超表达)植株中的GSNOR1水平增加，这些结果提示GSNOR1蛋白的稳定性受细胞内NO水平的调控。为了探讨Cys-10上的S-亚硝基化对GSNOR1稳定性的调节作用，在Cys-10上突变产生了两个突变体gsnor1^C10S和gsnor1^C10W，用外源GSNO处理gsnor1^C10W时，内源GSNOR明显减少，NO通过亚硝基化GSNOR的第十位半胱氨酸来调控GSNOR的稳定性

通过自噬抑制剂和蛋白酶体抑制剂处理gsnor1^C10W，检测GSNOR蛋白表达量和GSNOR1^C10W-GFP蛋白的荧光信号显示与溶酶体标记物LysoTracker red共定位，表明降解的GSNOR1^C10W-GFP定位在溶酶体中，另外在atg2,atg5, atg7, atg10突变体中，GSNOR的表达量升高，表明GSNOR通过选择性自噬途径降解；

一氧化氮增强对低氧胁迫的耐受性自噬的，主要生理作用是调节应激反应，而在动物和植物中，自噬又受NO的调节。gsnor1-3含有过量的NO，而NO通常被认为是种子萌发的促进因子，实验证明，在低氧条件下，nox1突变体的发芽率明显高于野生型，NO在低氧条件下促进种子萌发。

S-亚硝基化GSNOR1的水平在缺氧处理下强烈诱导，S-亚硝基化诱导拟南芥GSNOR1在缺氧反应中选择性自噬，作者通过在低氧和GSNO诱导作用下，观察gsnor1^C10W和gsnor1的萌发率，证明NO诱导的GSNOR1自噬降解在调节缺氧反应中起作用。