蛋白质浓度与盐胁迫的关系_斑节对虾在急性盐度胁迫下的免疫活性及哈氏弧菌对环境盐度的致病性...

摘要

盐度是一个重要的环境因素，在虾的生长系统中通常被忽视。本研究试图分析急性盐度胁迫下斑节对虾对哈维氏弧菌感染的生理和免疫学反应。通过肌肉注射在5‰盐度，35‰盐度和最佳盐度(15‰)条件下用哈氏弧菌侵染虾。对照组维持在无菌环境。在哈维氏弧菌攻击前(盐度变化后第0天)、攻击后第2天、第7天和第10天，从盐度变化后不久的对虾采集血淋巴。测定免疫指标总血细胞计数(THC)、酚氧化酶活性(PO)、硝基蓝四唑盐还原量(NBT)、碱性磷酸酶活性(ALP)、酸性磷酸酶活性(ACP)和代谢指标总蛋白(TP)、总碳水化合物(TC)、总游离氨基酸(TFAA)、总脂(TL)、葡萄糖(G1)和胆固醇(CH)。单因素方差分析和Duncan’s多重均值比较表明，不同盐度条件下的对虾与哈维氏弧菌攻击的对虾之间存在显著差异(P<0.05)。维持在15‰的对虾攻击后存活率显着提高，急性盐度胁迫降低了存活率。然而，哈维氏弧菌在35‰时的致病性略高于5‰时的致病性。在盐胁迫开始时，THC、NBT和ACP显著降低，在5‰和35‰时，TC升高。哈维氏弧菌攻击后，斑节对虾PCD2上的代谢变量和PCD2和7上的免疫变量总体上都比对照增加，维持在15‰。与对照相比，盐胁迫下虾的免疫应答和代谢变量在攻击后的天数有所增加，但与保持在15‰的虾相比，其免疫应答和代谢变量明显较低。回归分析证明，NBT、ALP、TP和TL可作为评价对虾健康状况的潜在应激指标。总之，研究表明，急性盐度变化引起的生理反应影响斑节对虾抵抗哈维氏弧菌攻击的免疫活性和代谢性能，从而增加其对感染的敏感性。此外，较高的盐度增强了哈维氏弧菌的致病性。

前言

细菌病原体引起的疾病暴发继续对许多对虾养殖国的对虾养殖业构成重大威胁。弧菌 引起诸如贝壳病，发光细菌性疾病和细菌败血症等一组疾病的绝对原因是虾的主要细菌病原体，并且已经成为虾生产的主要限制因素。哈维氏弧菌(V.harveyi)是引起发光性弧菌病的主要病原，广泛存在于各种海洋和微咸水生境中。弧菌病通常被认为是一种继发性感染，因为大多数弧菌作为对虾的继发性病原体，当其他生理或环境因素变得不利时会导致死亡。致病性弧菌数量大幅度增加。在养殖场中，池塘经常与弧菌病的发病率有关。弧菌的高毒力是导致疾病暴发的另一个重要因素。据报道，环境参数的波动对哈维氏弧菌对对虾的毒力有显著影响。需要制定更好的水产养殖健康管理策略来控制对虾养殖中的弧菌感染。盐度是影响海水对虾养殖的基本环境因素之一。斑节对虾(Penaeus Monodon)是一种广盐型的对虾，在亚洲部分地区主要养殖，可以耐受从1‰到57‰的广泛盐度。虽然它的等渗点为750 mOsm kg^-1(相当于25‰)，但通常在盐度为10‰到20‰的范围内培养，因为在养殖条件下，它们在微咸水中比在纯海水中生长更好。在养殖池中，盐度的波动几乎被忽略。虽然非常有效的高渗透压调节剂在暴露于不同的盐度时保持相对恒定的内部渗透压，但盐度的变化可能会给动物带来压力。斑节对虾的耐盐性在不同养殖家系之间存在差异。在特定范围内的急剧盐度变化可能会削弱对虾的免疫系统，使它们对哈维氏弧菌等继发性病原体非常脆弱。有证据表明，温度、盐度、pH、溶解氧、氨等环境因子的变化会引起对虾代谢的变化和免疫抑制，使它们更容易受到病原体的影响。然而，关于盐度波动对对虾对哈维氏弧菌感染易感性的影响的科学数据很少。本研究旨在探讨(1)急性盐度胁迫对对虾易感性的影响及盐度对哈维氏弧菌毒力的影响；(2)急性盐度胁迫下对虾对哈维氏弧菌感染的免疫和代谢反应。

方法与材料

实验动物

以Panangad, Kochi  (India)一个商业养殖场(盐度为15~18‰)获得的斑节对虾(平均湿重18.4±2.6g)为实验对虾。它们在捕获后1h内被运送到实验室，在装有15‰海水的混凝土矩形水箱中饲养。提供持续的通气量，并以商业虾饲料(Higashimaru, Kochi)喂养。水质参数，即盐度、温度、溶解氧、NH₃-N、NO₂-N和NO₃-N按照标准程序进行每日监测，并按表1保持在最佳水平。每天抽取未使用的饲料和粪便，每隔一天交换25%的水。设置了生物滤池，以维持适当的水质参数水平。饲养7天后，取一组对虾(n=6)作为基线(BL)，测定其代谢和免疫功能。

实验设计

将虾分别装在装有500L海水的实验水箱中(n=30个/水箱)。实验分为4组(I组、II组、III组和IV组)，实验分三组进行，每组3个水箱。只使用了蜕皮期的虾。所有水箱的盐度均调整为15‰。将虾放在15‰的实验水箱中保存7天。

表1 养殖条件和水质