html的readx()函数,Seurat包里面的Read10X_h5函数介绍

本人做肺纤维化研究,近期在Science Advance 上连续发了两篇单细胞文章,所以计划根据单细胞天地胶质瘤的单细胞CNS复现系列推文,复现一下。

本文使用的是题目为Senescence of Alveolar Type 2 Cells Drives Progressive Pulmonary Fibrosis.发表在Am J Respir Crit Care Med (IF17.4)2020 Sep 29. PMID: 32991815的文章,对应的GEO数据GSE146981(17个对照和11个肺纤维化样本)

发现并不是常规的一个样本由barcode, genes ,matrix 三个文件构成的数据形式,因为通常读取10x数据需要三个文件:barcodes.tsv, genes.tsv, matrix.mtx,而这个文章的数据是一个样本被整合成了一个H5文件。如下所示:

GSM4411701_ca02_filtered_gene_bc_matrices_h5.h5 10.7 Mb

GSM4411702_ca07_filtered_gene_bc_matrices_h5.h5 5.6 Mb

GSM4411703_ca12nep_filtered_gene_bc_matrices_h5.h5 1.4 Mb

GSM4411704_ca16nep_filtered_gene_bc_matrices_h5.h5 11.3 Mb

GSM4411705_cc04dep17_filtered_gene_bc_matrices_h5.h5 8.9 Mb

GSM4411706_cc04pep17_filtered_gene_bc_matrices_h5.h5 8.8 Mb

GSM4411707_cc04tep17_filtered_gene_bc_matrices_h5.h5 6.9 Mb

GS

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好的,下面是在R语言中使用Seurat进行主成分分析、计算p值以及执行t-SNE分析的示例代码: 1. 主成分分析 ```R library(Seurat) # 假设我们的数据存储在data矩阵中,每一行代表一个样本,每一列代表一个变量 seurat_obj <- CreateSeuratObject(data, project = "my_project") # 创建Seurat对象 seurat_obj <- NormalizeData(seurat_obj) # 标准化数据 seurat_obj <- ScaleData(seurat_obj) # 缩放数据 seurat_obj <- RunPCA(seurat_obj, pcs.compute = 20) # 进行主成分分析,设定计算20个主成分 ``` 2. 计算p值 ```R library(multtest) # 假设我们已经进行了t检验,并将结果存储在t_values中 # 假设我们要计算每个变量的p值 p_values <- mt.rawp2adjp(t_values, n = nrow(data), "BH") # 使用Benjamini-Hochberg方法校正p值 seurat_obj[["pvals"]] <- p_values # 将p值存储在Seurat对象中 ``` 3. t-SNE分析 ```R library(Seurat) # 假设我们要将数据降至20维,并进行t-SNE分析 seurat_obj <- FindNeighbors(seurat_obj, dims = 1:20) # 计算每个样本之间的邻居关系 seurat_obj <- FindClusters(seurat_obj, resolution = 0.5) # 根据邻居关系进行聚类 seurat_obj <- RunTSNE(seurat_obj, dims = 1:20) # 进行t-SNE降维,设定降至20维 ``` 需要注意的是,以上代码仅为示例代码,具体实现需要根据自己的数据和分析需求进行调整和修改。同时,Seurat提供了丰富的可视化函数,可以帮助我们更好地理解和解释分析结果。

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