摘 要:目的 采用UPLC法建立不同年份吴茱萸指纹图谱,结合化学模式识别技术对其进行分析,并测定其中4种质量差异性标志物的含量,为吴茱萸“陈久者良”的研究提供新的思路和对其质量评价提供依据。方法 基于UPLC法建立3种不同年份共47批吴茱萸样品的指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)计算相似度,运用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对样品进行模式识别。结果 建立了47批吴茱萸样品的UPLC指纹图谱(相似度均>0.997),标定了40个共有峰,指认了其中12个,运用PCA和OPLS-DA分析,有效区分了3种不同年份的吴茱萸,共筛选出22个质量差异性标志物,并对其中新绿原酸、绿原酸、吴茱萸碱和吴茱萸次碱4种成分的含量进行了测定。结论 通过吴茱萸UPLC指纹图谱与多成分化学模式识别技术相结合,能对不同年份的吴茱萸进行有效区分,为吴茱萸“陈久者良”及其质量控制提供参考依据。
吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa (Juss.) Benth.、石虎E. rutaecarpa(Juss.) Benth. var. officinalis (Dode)Huang或疏毛吴茱萸E. rutaecarpa (Juss.) Benth.var. bodinieri (Dode) Huang 的干燥近熟果实。其性味辛、苦,热;有小毒,具有温中散寒、降逆止呕、助阳止泻之功[1]。化学成分包括生物碱、柠檬苦素、黄酮、酚酸、多糖和挥发油等类[2-9]。
吴茱萸为中药“六陈”之一,首载于梁•陶弘景的《本草经集注》:“凡狼毒、枳实、橘皮、半夏、麻黄、吴茱萸皆欲得陈久者,其余唯须新精。[10]”张从正《儒门事亲》中亦有“药有六陈,陈久为良,狼茱半橘,枳实麻黄”[11]之言。新鲜的吴茱萸气味重,刺激性较强,通过陈放可使其药气逐渐挥发,化学成分缓慢变化[12],药性趋于缓和,避免服用时可能产生的毒副作用。张慧芳等[13]发现不同储藏时间和条件对吴茱萸挥发性成分的影响较大,但受限于药材批次(3批),无法准确表述不同年份吴茱萸之间的差异性。本实验采用UPLC指纹图谱结合化学模式识别的方式,通过相似度评价、SIMCA 14.1模式识别统计分析软件中主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA),区别于以往对产地或基原关系的化学模式判别[14-15],对47批吴茱萸样品中40个共有峰的差异性标志物进行筛选,揭示3种不同年份吴茱萸的差异,为“陈久者良”提供新的研究思路及其质量控制提供参考依据。
1 仪器与试剂
Waters UPLC ACQUITYH-Class型超高效液相色谱仪,包括四元溶剂管理器、SM-FTN样品管理器、柱温箱、二极管阵列(PDA)检测器和Empower 3色谱工作站(美国waters公司);AE240十万分之一电子天平(美国Mettle公司);SQP型电子天平 [万分之一,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司];YB502N电子天平(百分之一,上海海康电子仪器厂);KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,功率200 W,频率40 KHz);Milli QB型超纯水净化系统(美国Millipore公司)。
吴茱萸碱(批号110802-20