指纹图谱相似度评价软件_基于指纹图谱和网络药理学对当归四逆汤中桂枝的Qmarker预测分析...

摘  要：目的  基于指纹图谱和网络药理学分析预测当归四逆汤(DSD)中桂枝的质量标志物(Q-marker)。方法 建立桂枝水煎液和DSD的指纹图谱，利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012年版)进行分析；采用网络药理学筛选和分析桂枝相关成分的作用靶点和通路，构建“成分-靶点-通路”网络，预测DSD中桂枝潜在的Q-marker。结果 建立了15批桂枝水煎液和15批DSD的指纹图谱，相似度均＞0.96，并指认出7个共有成分，分别为原儿茶酸、香豆素、肉桂酸、桂皮醛、桂皮醇、2-甲氧基肉桂酸和2-甲氧基桂皮醛；通过网络药理学筛选出桂枝的5个活性成分、7个核心靶点和15条关键通路；基于Q-marker“五原则”分析预测2-甲氧基桂皮醛、桂皮醛、肉桂酸为其潜在的Q-marker。结论 通过指纹图谱和网络药理学分析预测DSD中桂枝的Q-marker，为全面控制DSD的质量提供依据，为进一步研究DSD的作用机制提供参考，同时为经典名方中复方及单味药的Q-marker的关联性研究提供示范。

当归四逆汤(DSD)是张仲景《伤寒论》中的经典名方之一。《伤寒论》第351条言：“手足厥寒，脉细欲绝者，当归四逆汤主之。”DSD由当归、桂枝、白芍、细辛、甘草、木通、大枣7味药组成，具有温运血行、散寒通脉等功效，主治血虚寒厥证^[1-2]。现代临床在内科、外科、妇科等疾病上都有广泛的应用，主要用于治疗痛经、糖尿病周围神经病变、肿瘤、肾病、慢性肺源性心脏病、胃炎和荨麻疹等疾病^[3-10]。方中桂枝辛温，温经散寒以通脉，与当归共为君药；白芍、细辛共为臣药，助桂枝温通血脉。桂枝来源于樟科植物肉桂Cinnamomum cassiaPresl. 的干燥嫩枝，味辛、甘，性温，具有发汗解肌、温通经脉、助阳化气、平冲降气之功效，主要用于风寒感冒、脘腹冷痛、血寒经闭、关节痹痛、痰饮、水肿、心悸、奔豚等症^[11]。研究表明，桂枝在临床上一般用于治疗肿瘤、类风湿关节炎、痛经、糖尿病周围神经病变、心血管、痉挛等疾病^[12-14]。

中药质量标志物(Q-marker)是刘昌孝院士^[15-16]于2016年针对中药生物属性、制造过程及配伍理论等特点提出的新概念，是中药质量评价与控制的核心概念。Q-marker具有有效性、特有性、传递与溯源性、可测性和处方配伍“五原则”的特点，能够反映中药的安全性和有效性，有利于建立中药全程质量控制及质量溯源体系。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴定手段，具有整体性和模糊性的特点，能够反映中药及其制剂内在质量的稳定性和均一性，是控制水煎液、复方制剂等失去中药外表特征的中药制剂的有效手段^[17-18]。中药和复方制剂成分复杂，具有多成分、多靶点及多通路的特点，使其作用机制研究困难。网络药理学具有系统性与整体性的特点，运用网络药理学对中药进行系统分析，有助于反映及阐释中药的活性成分与靶点之间的作用关系^[19-22]。本研究通过建立桂枝水煎液和DSD的指纹图谱，采用指纹图谱和网络药理学相结合的方法分析预测DSD中桂枝的Q-marker，为全面控制DSD的质量提供依据，为进一步研究DSD的作用机制提供参考，同时为经典名方中复方与单味药的Q-marker的关联性研究提供示范。

1  仪器与试药

1.1  仪器

Waterse 2695型高效液相色谱仪，包括四元泵、柱温箱、自动进样器、PDA检测器和Empower工作站(美国Waters公司)；MS-105D型1/10万电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；TD5001C型电子天平(天津天马衡基仪器有限公司)；KQ-500B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；H1650-W型台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)。

1.2  试药

桂皮醛(批号SSELDLI，质量分数＞98%)购自东京化成工业株式会社；肉桂酸(批号AA0807DA14，质量分数≥98%)、桂皮醇(批号Y04N7C23850，质量分数≥98%)、香豆素(批号Y29M9C57109，质量分数≥98%)、原儿茶酸(批号H21J9Z64031，质量分数≥98%)、2-甲氧基肉桂酸(批号RA0424FA14，质量分数≥98%)、