非生长偶联发酵改造_【每日动态】齐鲁工业大学王腾飞：枯草芽孢杆菌中的重组海藻糖合酶通过整合发酵和生物催化促进海藻糖的生产...

枯草芽孢杆菌中的重组海藻糖合酶通过整合发酵和生物催化促进海藻糖的生产 Journal of Agricultural and Food Chemistry 推荐人|许美娜 研究背景海藻糖有广泛的应用前景，但因制取成本高而限制了其大规模的生产。而海藻糖合酶(TreS)可以以一步转化法将麦芽糖转化为海藻糖，从而提高海藻糖的产量。枯草芽孢杆菌具有非致病性的特征，而且生长速度快，便于进行基因操作，适用于大规模的工业生产。 研究方法首先将枯草芽孢杆菌W800N中的xpF，skfA，lytC，sdpC，malP和amyE基因敲除，合成PsrfA启动子。使枯草芽孢杆菌WB800N发酵分泌TreS，随后与麦芽糖浆合并进行整合发酵和生物催化生产海藻糖。从发酵液中分离出重组枯草芽孢杆菌WB800N进行SDS-PAGE和蛋白质印迹分析。最后测定TreS活性和海藻糖的含量。 研究结果P43启动子的控制对TreS表达和初始表达时间优于其他启动子，同时发酵结果表明，重组枯草芽孢杆菌WB800N/pHT01-P43-PhoD-treS中的TreS较为稳定。因此，P43为最适启动子。剔除与细菌裂解有关的四个关键基因skfA，sdpC，lytC和xpF的枯草芽孢杆菌WB800N-D4菌株，在发酵液中的胞外酶活性明显提高；蔗糖对细胞生长和TreS分泌表达最为有益；初始糖浓度为80％-85％时，海藻糖的结晶速率与纯度都会有提高；海藻糖的纯度和结晶度随冷却速率的降低而增加，最佳冷却速度为1.0°C/h。 研究结论枯草芽孢杆菌具有将高浓度的蛋白质分泌到培养基中的能力，并且分泌途径有明确特征。P43启动子和SPPhoD信号肽适用于枯草芽孢杆菌WB800N中的TreS分泌表达，因此可以使用枯草芽孢杆菌作为表达宿主对TreS进行表达。海藻糖生产的整个技术包括:(1)构建分泌TreS的枯草芽孢杆菌(2)使TreS在麦芽糖中进行发酵和生物催化生产海藻糖(3)使用纳米滤膜分离海藻糖，并通过连续冷却使海藻糖结晶。 原文链接Trehalose Production Using Recombinant Trehalose Synthase in Bacillus subtilis by Integrating Fermentation and Biocatalysis.Hongling Liu,Song Wang, Longxiang Song,Haibo Yuan, Kaiquan Liu, Wu Meng, and Tengfei Wang. Journal of Agricultural and Food Chemistry 2019, 67, 33, 9314-9324.https://doi.org/10.1021/acs.jafc.9b03402 王腾飞王腾飞，齐鲁工业大学生物工程学院，生物工程系，教授主要研究方向：传统微生物发酵与酿造技术研究；发酵废物的微生物体系处理与再利用研究；工业微生物表达体系的改造，优化与产业设计；工业用酶的新酶挖掘与分子改造及酶的高效表达研究。近三年发表SCI论文11篇、EI论文1篇。近五年出版专著2部，发明专利14项，获省级奖励4项，厅局级奖励4项。社会兼职：国家自然基金委基金评审专家；山东省安全生产管理协会评审专家；山东省中兽药协会学术委员会副主任兼副秘书长；山东省医药生物技术学会生物标记与体外诊断技术专业委员会常务委员。  孟武，齐鲁工业大学生物工程学院，生物工程系研究方向：微生物生理生化，乳酸生成菌的乳酸发酵调控及分子改造研究，芽孢杆菌的代谢调控及代谢产物的过程优化研究。发表SCI论文2篇、EI论文1篇。参与3项科研项目。  关于原创：‘原创’仅为本平台原创编译之标记，不表示本平台对文本主张版权。作者团队或单位如需使用编译文本，可联系小助开放白名单。 本期版主：周华璐

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