凋亡比例计算 流式_成像流式细胞仪的技术突破与应用

成像流式细胞仪(Imaging Flow Cytometry， IFC)将显微镜的单细胞成像功能与传统流式细胞仪的高通量功能相结合，革新了单细胞分析技术。本文着重介绍成像流式细胞仪的成像技术突破及其相关应用。

起

流式细胞术是在细胞计数、生物标志物检测以及细胞分选中的强大技术，支持数百至100000个细胞的速度检测单细胞特性。由于高通量及多参数的特性，流式细胞术在各大研究领域广泛应用。但传统流式细胞仪缺乏成像能力，而对于单细胞分析而言，成像无疑是必不可少的，因为图像可以提供更多相关细胞的有效信息，例如细胞大小、形状形态以及标记物在细胞内的分布和定位等。将成像技术引入传统流式细胞术中，增加传统流式细胞仪的空间分辨率，可提供每个细胞的高速综合分析和深入成像。

目前，显微成像已实现三维及超高分辨率，可以对超出衍射范围的生物结构和功能分析成像，产生极其细致的细胞荧光图像，但这需要耗费数分钟或以上的时间，且对样本有较高的要求。为了匹配流式细胞仪的高通量、快速检测特性，成像流式细胞仪基于传统流式细胞仪的流体系统，成像模块需在采集速度、灵敏度以及信息量之间进行权衡。

技术与方法

成像技术关键挑战在于信号检测，目前成像平台使用的检测器有两类：(1)多像素成像器件，如电荷耦合器件(CCD)和互补金属氧化物半导体(CMOS)；(2)单像素光电探测器，如光电倍增管(PMT)和雪崩光电二极管(APD)。

1.基于相机成像的IFC  

ImageStream

由Millipore开发的IFC系统(如ImageStream和FlowSight)采用的是时间延迟和积分(TDI)技术的高速CCD相机，该类型的CCD相机通过多排的传感器实现更高的灵敏度，这些传感器将其部分测量值及运动细胞的移动图像同步到相邻传感器，应用这种读出技术，可以检测到微弱的荧光信号，而不会因为曝光时间增加而引起运动模糊。CCD检测阵列被分成N列，以检测来自细胞N个不同光谱范围的发射光或散射光。通过光谱拆分或光谱解析，每个细胞可以同时获得12张图像。图1为ImageStre