细胞污染及污染源排查与细胞传代、冻存

17号给SY5Y换液，细胞密度大概在40-50，18号下午观察到SY5Y略显浑浊且有炫富小黑点，未在意。19号上午再次观察发现溶液浑浊显现为浑白色，并伴有热烈酸腐味道。镜下观察绝大多数细胞脱离底壁悬浮收缩，确认细胞被污染且无挽救之可能。首要问题是排查污染源，四瓶细胞悉数覆没，可能与培养液，操作不当、培养箱灭菌等有关。将新鲜培养液放置于培养箱中，24小时后出现低密度小黑点，再次过夜后溶液浑浊不堪，小黑点数量增多密密麻麻。将新配的培养液按照如上方式操作做，48小时后依然清澈无污染。断定培养液是污染源。
4瓶SY5Y全军覆没是一个不小的损失，是一个打击也是一次经验。无菌意识不强，操作中经常出现失误，致使细胞污染。好在SY5Y已保存留种6只，不用再次从新订购。22号复苏SY5Y一只，传代至2瓶，生长良好。
PC12和SY5Y都是贴壁生长的细胞，前者贴壁疏松、后者完全贴壁。PC12吹打即可脱落，SY5Y需用含有EDTA的胰酶消化后再吹打。之前的实验中，对PC12传代时，使用胰酶消化细胞。传代后的细胞一度成团现象严重，不利于生长。接下来的实验中注意到这个们提并做了探究，分别用胰酶消化20S、10S、0S的细胞，吹散程度并无差别。这表明胰酶消化时间对细胞成团的影响不大。有些细胞刚传代后镜下观察并无成团现象，但4小时候观察发现，有大量成团细胞，甚至肉眼可察。请教万老师后了解到，吹散的细胞有成团趋势，易成团。多次着实用力吹打有利于解决这一问题。另外，为了使传代后的细胞增殖更快，一般在细胞密度较大时才进行传代，且1：2传代。这就造成了传代后的细胞密度过大，吹打充分后，也易成团。11.23冻存了12只PC12（5百万/ml），另一瓶总体密度约85%，1：3传代，离心后着实用力吹打。今日观察发现，成团较少，分布均匀，生长良好。