小鼠大脑冰冻切片

一：准备工具

孔板(小鼠脑是12孔板，脊髓24孔板) ，PBS 1X ，长刀片，OCT，锡纸及正方体模具，备用冻头，酒精，吸水纸，记号笔，镊子（钝头用来夹出组织，尖头用来夹片）

二：准备工作

1.酒精擦拭工作台

2.开机设置温度（一般-20）

3. 插入刀片，旋紧

4.用锡纸制作正方体模具

5.12孔板标记日期，编号。用胶头滴管滴入PBS

实验步骤：

1.温度降到-20℃后，在冻头和模具中滴入OCT。

冷冻好后，冻头放入机器削平表面

 2.镊子夹出组织放在吸水纸上吸水，正方体锡纸模具表面标记好所放组织的编号→组织摆在正方体锡纸模具中（一般脑组织嗅球侧朝模具标记的方向）→滴入OCT没过组织→冷冻凝固

3.完全凝固后，在前面滴OCT并修平整的冻头上再滴一滴OCT（为了粘连），锡纸脱模，嗅球侧朝上粘在冻头上。。

 4.准备好后开始切片

先设置好厚度，调整机器位置（本次实验修整的厚度是50mm，切片厚度是30mm）

修整时不需要盖玻璃挡板，留片时需要盖。挡板前端差不多与刀片齐平

5.把孔板伸入箱内，用镊子夹起脑片，垂直放入PBS中。孔板上标记好开始出现血肿的地方

 6.清理，关机。脑片放置在4℃保存