IPTG诱导的产物是重组后表达载体中的插入序列所能够翻译的蛋白,并可视载体构建情况翻译后续的标签序列。
用乳糖操纵子作为启动子进行蛋白质表达的时候,需要诱导物进行诱导(相当于点火),但乳糖可以被细胞利用掉,所以利用IPTG(异丙基-β- D硫代半乳糖苷)在结构.上与乳糖的相似性也可以将基因表达启动,但它不能被细胞利用掉,从而实现持续的表达.
IPTG是一种诱导外源基因表达的诱导剂,它不仅仅如我们学过的作为乳糖的类似物诱导大肠杆菌表达半乳糖苷酶,它是一种普遍应用的诱导剂,能诱导菌种表达多种外源基因。
但是它能诱导基因表达的具体原理我却了解的不是很多,我在网上查到以下一些内容,供查阅者借鉴
最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵子,乳糖的类似物IPTG可以和lac|产物结合,使其构象改变离开lacO,从而激活转录. 这种可诱导的转录调控成为了大肠杆菌表达系统载体构建的常用元件。tac启动子是trp启动子和lacUV5的拼接杂合启动子,且转录水平更高,比lacUV5更优越。trc启动子是trp启动子和lac启动子的拼合启动子,同样具有比trp更高的转录效率和受lacI阻遏蛋白调控的强启动子特性。在常规的大肠杆菌中,lacI阻遏蛋白表达量不高,仅能满足细胞自身的lac操纵子无法应付多拷贝的质粒的需求,导致非诱导条件下较高的本底表达,为了让表达系统严谨调控产物表达,能过量表达lacI阻遏蛋白的laclq突变菌株常被选为Lac/Tac/trc表达系统的表达菌株。现在的Lac/Tac/trc载体上通常还带有laclq基因,以表达更多lac|阻遏蛋白实现严谨的诱导调控。IPTG 广泛用于诱导表达系统,但是IPTG有一定毒性,有人认为在制备医疗目的的重组蛋白并不合适,因而也有用乳糖代替IPTG作为诱导物的研究。另外一种研究方向是用lacl的温度敏感突变体, 30度下抑制转录,42度开发。热诱导不用添加外来的诱导物,成本低,但
IPTG诱导蛋白表达的原理
最新推荐文章于 2024-11-26 14:56:54 发布