《生物化学与分子生物学》----酶----听课笔记（八）

第八章  酶通论

5.1.1 酶通论（1）

• 酶始于19世纪对发酵过程的研究：1810年，Gaylussac发现，酵母可使糖转化为酒精。
• 1897年，Buchner兄弟用不含细胞的酵母汁成功实现了发酵。提出了发酵与活细胞无关，而与细胞液中的酶有关。
• 1982年，Cech和Altman对四膜虫的研究中发现RNA具有催化作用，从而发现核酶（ribozyme），打破了以往酶是蛋白质的传统观念。获诺贝尔奖。
• 1986年，Schultz和Lerner等人研制成功抗体酶（abzyme）；Boyer和Wlker阐明了ATP合酶合成与分解ATP的分子机制，并于1997年获得诺贝尔化学奖。
• 至今已鉴定的酶超过4000种。
• 酶是活细胞产生的一类具有催化功能的蛋白质（或核酸），亦称为生物催化剂（biocatalysts）。
• 酶催化的生物化学反应，称为酶促反应（enzymatic reaction）。
• 在酶的催化下发生化学变化的物质，称为底物（substrate）。
• 酶和一般催化剂比较：

1. 酶能够改变化学反应的速度，但是不能改变化学反应平衡。酶本身在反应前后也不发生变化。
2. 酶能够稳定底物形成的过渡状态，降低反应的活化能，从而加速反应的进行。

• 酶作为生物催化剂的特性：

1. 酶易失活：凡能使蛋白质变性的因素如强酸、强碱高温等条件都能使酶破坏而完全失去活性。
2. 高的催化效率
3. 高度专一性：酶的专一性（specificity）又称为特异性，是指酶在催化生化反应时对底物的选择性，即一种酶只能作用于某一类或某一种特定的物质，亦即酶只能催化某一类或某一种化学反应。
4. 酶活力可调节和控制：酶浓度的调节（诱导或抑制酶的合成；调节酶的降解）；激素调节酶的活性；反馈抑制调节酶的活性；抑制剂和激活剂的调节；其他调节方式：共价修饰调节、别构调节、酶原激活、同工酶等。

• 转换数（turnover number，TN or kcat）：每秒钟或每分钟，每个酶分子转换底物的分子数，或每秒钟或每分钟每摩尔酶转换底物的摩尔数。其大小可以反映酶的催化效率。

5.1.2 酶通论（2）

• 酶的化学本质及组成：除了核酶外，几乎所有的酶都是蛋白质。原因：

1. 水解产物是氨基酸
2. 能被蛋白质变性剂所失活
3. 两性电解质
4. 不能透过半透膜
5. 具备蛋白质所有的化学颜色反应

• 酶的化学组成：单纯蛋白质酶类（simple protein）；结合蛋白质酶类（conjugated protein）
• 结合蛋白质酶类：酶蛋白（apoenzyme、apoprotein），辅助因子（cofactor）
• 辅助因子：金属离子、金属有机物、小分子有机物
• 全酶（holoenzyme）=酶蛋白+辅助因子
• 辅助因子：辅酶（coenzyme）;辅基（prosthetic group）
• 酶的分子特点：单体酶；寡聚酶；多酶复合体
• 酶的命名和分类：习惯名称，系统名称
• 习惯名称：根据底物，如淀粉酶、蛋白酶；根据催化反应性质，如水解酶、氧化酶。
• 系统名称：标明底物，催化反应的性质；两个底物参加反应时应同时列出，中间用冒号分开，如其中有一个底物是水，则可略去。
• 国际生物化学会酶学委员会（Emzyme Commission）将酶分成六大类：1.氧化还原酶类；2.转移酶类；3.水解酶类；4.裂合酶类；5.异构酶类；6.连接酶类（合成酶类）。
• 六大类酶催化反应的性质
• 氧化还原酶类：包括氧化酶类、脱氢酶类、过氧化氢酶、过氧化物酶等。催化底物脱氢等。
• 转移酶类催化基团的转移。
• 裂合酶类从底物移去一个基团而形成双键或逆反应。
• 异构酶类催化异构化反应。
• 连接酶类将两个小分子合成一个大分子，通常需要ATP功能。
• 酶专一性类型：结构专一性，立体异构专一性
• 结构专一性：酶对所催化的分子-底物化学结构的特殊要求和选择。类别：绝对专一性，相对专一性。
• 立体异构专一性：酶除了对底物分子的化学结构有要求外，对其立体异构也有一定的要求。类别：旋光异构专一性、几何异构专一性。

5.1.3 酶通论（3）

• 关于酶作用专一性的假说：

1. 锁钥假说（lock and key theory）1894年Fischer提出。
2. 诱导契合学说（induced-fit theory）1958年Koshland提出。

• 酶的活力测定和分离纯化
• 酶活力：也称酶活性，指酶催化一定化学反应的能力。其大小可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的反应速率来表示。
• 酶反应速度：用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。单位：浓度/单位时间。
• 随反应时间的延长，酶反应速度会降低。原因：1.底物浓度的降低；2.酶的部分失活；3.产物对酶的抑制。因此研究酶反应速度以酶促反应的初速度为准。
• 酶的活力单位，即酶单位（U）。
• 在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需要的酶量。这样酶的含量就可以用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶单位来表示（单位是U/g或U/ml）.
• 1961年，提出用“国际单位”（IU）表示酶活力，即，在最适反应条件下（25℃，最适底物浓度和最适pH），每分钟内能转换1微摩尔底物转化为产物所需的酶量。1IU=1μmol/min
• 1972年，新的酶活力国际单位：在最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量，定为1Kat=1mol/s.
• 酶的比活力（specific activity）：代表酶的纯度。每毫克酶蛋白所具有的酶活力单位数，用U/mg蛋白、IU/mg蛋白、Kat/mg蛋白表示。实质表示单位蛋白质的催化能力。
• 酶活力测定方法：测定完成一定量反应所需的时间；测定单位时间内酶催化的化学反应量。
• 测定酶活力就是测定产物增加量或底物减少量，主要根据产物或底物的物理或化学特性来决定测定方法。
• 分光光度法：该法要求酶的底物和产物在 紫外或可见光部分光吸收不同。有点：简便、迅速、准确。一个样品可多次测定，有利于动力学研究。
• 荧光法：主要利用底物或产物的荧光性质。灵敏度高，但易受到干扰。
• 同位素标记法：同位素标记底物，反应后经分离，检测产物的脉冲数，即可换算成酶的活力单位。灵敏度最高。
• 电化学法：pH计、氧电极法。
• 关于酶的分离和纯化：总活力：损失；比活力：纯度
• 核酶
• 自我剪接（self-splicing）

5.1.4 酶通论（4）

• 核酶具有经典酶促催化标志：高度专一；符合米氏方程；对竞争性抑制剂敏感。
• 核酶发现的重大意义：RNA具有酶的催化活性，向酶的化学本质是蛋白质这一传统概念提出了挑战；在理论上，对于生物起源和生命进化研究具有重要启示。
• 在实践上，由于核酶的内切酶活性，可定点切割mRNA，破坏RNA，抑制基因表达，为基因、病毒和肿瘤治疗提供了可行途径。
• 抗体酶：指具有催化活性的免疫球蛋白，即在其高可变区赋予了酶的属性。是抗体的高度选择性与酶的高效催化性相结合的产物。
• 抗体酶的意义：

1. 抗体酶的方法有利于研究生物催化反应过程中的过渡态、极性效应、一般的酸碱催化和亲核催化等机理，从而对于理解自然界酶功能的演变历程具有重要的理论意义。
2. 抗体酶为科学研究和工业应用打开了一个新的平台，为酶学、免疫学、化学和医学的有机结合搭建了一个成功桥梁。为蛋白质的研究提供新手段；设计新型生物药物；应用于工业制药（立体专一性抗体酶）