重组人 β- 细胞素：肝癌侵袭转移研究的新钥匙

β 细胞素（betacellulin）

重组人 β- 细胞素是通过大肠杆菌表达的重组人 betacellulin ，制备出来的蛋白在 n 端比 betacellulin 序列多了一个甲硫氨酸。β 细胞素（betacellulin，简称 BTC）是表皮细胞生长因子家族的一员，在很多器官系统的正常发育过程中起着关键作用，尤其是在胰腺组织中大量表达，这表明 β 细胞素可能在胰腺发育以及胰腺干细胞分化方面有着重要作用。​

β 细胞素蛋白

β 细胞素蛋白（betacellulin，也叫 btc 蛋白）是一种由转基因小鼠的胰腺 β 肿瘤细胞产生的多肽因子 ，通过对 cdna 的分析，它的全长氨基酸序列已经研究得很清楚了。最开始，btc 蛋白被发现能促进小鼠 3t3 细胞生长，后来又发现它对血管平滑肌细胞和视网膜色素上皮细胞的生长也有促进作用。​

在正常生理情况下，人体内的 btc 蛋白数量极少，而且受各种因素限制，从组织里提取非常困难。近些年来，借助基因工程技术，已经能够成功生产出数量较多、价格相对便宜的人 btc 蛋白。有报道显示，btc 蛋白可用于治疗创伤、肿瘤、血管畸形等疾病，还能制成抗体或假性肽竞争剂，用来治疗动脉粥样硬化、糖尿病视网膜病变等因平滑肌生长引发的疾病。​

在现有的技术里，制备 btc 蛋白大多采用基因工程方法，主要通过大肠杆菌和哺乳动物细胞来表达。以往有报道称，用哺乳动物细胞表达 betacellulin 时，会使用含血清的培养基。但血清批次间差异大，成分不一致，导致重组蛋白稳定性差，而且血清可能让表达的重组蛋白存在病毒风险，不利于后续的工业化生产。用大肠杆菌表达时，会引入外源融合标签，并且制备过程中不对标签进行切割去除，外源标签的存在会严重影响 betacellulin 的结构和功能，致使重组 betacellulin 失去活性，或者产生非预期的功能。​

案例分享

原发性肝癌（Hepatocellular carcinoma，简称 HCC）是我国常见的消化系统恶性肿瘤，它发展速度快，预后效果差。肝癌很容易在早期就发生转移，这是导致肝癌预后不好的重要原因，所以研究肝癌的转移机制一直是肝癌研究的热点。β 细胞素（betacellulin，简称 BTC）是表皮细胞生长因子（epidermal growth factor，简称 EGF）家族的成员之一 。近年来的研究表明，BTC 可能参与了肿瘤生长发展的生物学过程。​

研究的目的是探究 BTC 在肝癌细胞和组织中的表达异常情况，以及它对肝癌的作用和机制。具体要检测 BTC 在肝癌细胞与正常肝细胞、肝癌组织与癌旁组织中的表达差异，明确 BTC 对肝癌侵袭性的作用，并研究其调控机制。​

研究方法如下：​

用 RT-PCR 和 Western blot 技术，检测 4 种肝癌细胞系（Huh7、HepG2、SMCC - 7721、MHCC97 - H）以及正常肝细胞系（HL - 7702）中 BTC 的表达情况。​

采用免疫组化染色的方法，对比肝癌组织和癌旁组织中 BTC 的表达，分析其对肝癌病理特征的影响。​

对 SMCC - 7721、MHCC97 - H 细胞，一方面用 siRNA 降低 BTC 的表达，另一方面在细胞培养液中加入重组人 BTC 。分别通过 MTT 法以及 Transwell 迁移、侵袭实验，研究 BTC 对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响，并分析其中的机制。​

研究结果如下：​

BTC 在肝癌细胞系（Huh7、HepG2、SMMC - 7721、MHCC97H）中的表达量，明显高于正常肝细胞系（HL - 7702），而且随着肝癌细胞系侵袭能力变强，BTC 表达量也增高，差异具有统计学意义（P<0.05）。​

BTC 在肝癌组织及其附近呈现高表达，当肿瘤直径≥3 厘米，癌组织浸润包膜时，BTC 表达也存在差异，具有统计学显著性（P<0.05）。​

通过 siRNA 降低 BTC 表达后，SMCC - 7721 和 MHCC97 - H 细胞的增殖、迁移、侵袭能力下降；在培养液中加入 BTC 后，SMCC - 7721 和 MHCC97 - H 细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强。并且明确了 BTC 可能通过 PI3K/AKT 信号通路影响 XIAP 表达，来实现上述调控。​

结论

BTC 在肝癌细胞和肝癌组织中的表达量，分别高于正常肝细胞和癌旁组织，与肝癌的病理特征相关，并且可能通过激活 PI3K/AKT 信号通路上调 XIAP 表达，增强肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力。