Crizotinib (PF-02341066) 是一种具有口服生物利用度的 ATP 竞争性 ALK 和 c-Met 抑制剂 |MCE

中文名：克唑替尼

CAS：877399-52-5

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Crizotinib (PF-02341066) 是一种具有口服生物利用度的 ATP 竞争性 ALK 和 c-Met 抑制剂，IC 为 50 分别为 20 和 8 nM。在基于细胞的测定中，Crizotinib 抑制 NPM-ALK 的酪氨酸磷酸化和 c-Met 的酪氨酸磷酸化，IC50 分别为 24 和 11 nM。 Crizotinib 也是一种ROS1 抑制剂。克唑替尼具有有效的肿瘤生长抑制作用[1][2][3]。 IC50 和目标：IC50：20 nM (ALK)，8 nM (c-Met)[3] 

体外：Crizotinib (PF-02341066) 在 mIMCD3 小鼠或 MDCK 犬上皮细胞中显示出类似的抗 c-Met 磷酸化作用，IC50 分别为 5 nM 和 20 nM。 PF-2341066 对经改造以表达 c-Met ATP 结合位点突变体 V1092I 或 H1094R 或 P-环突变体 M1250T 的 NIH3T3 细胞表现出改善或相似的活性，IC50 分别为 19 nM、2 nM 和 15 nM，分别与表达野生型受体的 NIH3T3 细胞相比，IC50 为 13 nM。相比之下，与野生型相比，PF-2341066 对表达 c-Met 激活环突变体 Y1230C 和 Y1235D 的细胞的效力发生显着变化，IC50 分别为 127 nM 和 92 nM型受体。 PF-2341066 还有效地阻止 NCI-H69 和 HOP92 细胞中 c-Met 的磷酸化，IC50 分别为 13 nM 和 16 nM，它们表达内源性 c-Met 变体 R988C 和 T1010I , respectively[1].
Crizotinib (PF-02341066) 也有效抑制 Karpas299 或 SU-DHL-1 ALCL 细胞中的 NPM-ALK 磷酸化，IC 为 50 24 纳米。 PF-2341066 有效阻止细胞增殖，这与 G(1)-S 期细胞周期停滞和诱导 ALK 阳性 ALCL 细胞凋亡相关，IC50 为 30 nM，但对 ALK 无效-阴性淋巴瘤细胞[2]。

体内：Crizotinib (PF-02341066) 在 50 mg/kg/天和 75 mg/kg/天的治疗队列中显示出导致大的既定肿瘤（> 600 mm3）显着消退的能力，在 GTL-16 模型的 43 天给药方案中，平均肿瘤体积减少了 60%。在另一项研究中，PF-2341066 显示出能够完全抑制 GTL-16 肿瘤生长超过 3 个月，在 50 mg/kg/ 的 3 个月治疗方案中，12 只小鼠中只有 1 只表现出肿瘤生长显着增加天。在 GTL-16 肿瘤中以 12.5 mg/kg/天、25 mg/kg/天和 50 mg/kg/天观察到 CD31 阳性内皮细胞的显着剂量依赖性减少，表明抑制 MVD 显示剂量-与抗肿瘤功效的相关性。 PF-2341066 在 GTL-16 和 U87MG 模型中显示出显着的剂量依赖性人 VEGFA 和 IL-8 血浆水平降低。在口服给予 PF-2341066[1] 后，在 GTL-16 肿瘤中观察到磷酸化 c-Met、Akt、Erk、PLCλ1 和 STAT5 水平的显着抑制。
含有 50 mg/kg PF-2341066 的 MET 扩增 GTL-16 异种移植物引起肿瘤消退，这与 18F-FDG 摄取的缓慢减少和葡萄糖转运蛋白 1、GLUT-1 的表达降低有关[4]。

激酶试验：将细胞接种在 96 孔板中补充有 10% 胎牛血清 (FBS) 的培养基中，并在 24 小时后转移至无血清培养基 [含 0.04% 牛血清白蛋白 (BSA)]。在研究配体依赖性 RTK 磷酸化的实验中，添加相应的生长因子长达 20 分钟。将细胞与 PF-2341066 和/或适当的配体孵育指定时间后，用补充有 1 mM Na3VO4 的 HBSS 洗涤细胞一次，并从细胞中产生蛋白质裂解物。随后，使用用于包被 96 孔板的特异性捕获抗体和对磷酸化酪氨酸残基具有特异性的检测抗体，通过夹心 ELISA 方法评估所选蛋白激酶的磷酸化。抗体包被板 (a) 在蛋白质裂解物存在下于 4°C 孵育过夜； (b) 用含 1% Tween 20 的 PBS 洗涤七次； (c) 在辣根过氧化物酶缀合的抗总磷酸酪氨酸（PY-20）抗体（1:500）中孵育30分钟； (d)再清洗七次； (e) 在 3,3',5,5'-四甲基联苯胺过氧化物酶底物中孵育以启动比色反应，通过添加 0.09 N H2SO4 来终止该反应； (f) 使用分光光度计测量 450 nm 处的吸光度。

细胞试验：将肿瘤细胞以低密度接种在 96 孔板中，添加有 10% FBS（生长培养基）的培养基中，并在 24 小时后转移至无血清培养基（0% FBS 和 0.04% BSA）。将适当的对照或指定浓度的 PF-2341066 添加到每个孔中，并将细胞孵育 24 至 72 小时。将人脐血管内皮细胞 (HUVEC) 以每孔 > 20,000 个细胞的密度接种在 96 孔板的 EGM2 培养基中 5 至 6 小时，然后转移至无血清培养基过夜。第二天，将适当的对照或指定浓度的 PF-2341066 添加到每个孔中，孵育 1 小时后，将 HGF 以 100 ng/mL 添加到指定的孔中。进行 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑测定以确定相对肿瘤细胞或 HUVEC 数量。

动物体内实验:携带异种移植物 (300-800 mm3) 的无胸腺小鼠通过口服管饲法以指定剂量水平给予水中的 PF-2341066。在 PF-2341066 给药后的指定时间，对小鼠进行人道安乐死，并切除肿瘤。使用液氮冷却的冷冻研钵和杵将肿瘤速冻并粉碎，产生蛋白质裂解物，并使用 BSA 测定法测定蛋白质浓度。使用捕获 ELISA 或免疫沉淀-免疫印迹方法测定总蛋白和磷酸化蛋白的水平。

 参考详情：www.medchemexpress.cn/Crizotinib.html 

参考文献：

[1]. Liu H, et al. Identifying and Targeting Sporadic Oncogenic GeneticLiu H, et al. Identifying and Targeting Sporadic Oncogenic Genetic Aberrations in Mouse Models of Triple Negative Breast Cancer. Cancer Discov. 2018 Mar;8(3):354-369.

[2]. Christensen JG, et al. Cytoreductive antitumor activity of PF-2341066, a novel inhibitor of anaplastic lymphoma kinase and c-Met, in experimental models of anaplastic large-cell lymphoma. Mol Cancer Ther. 2007, 6(12 Pt 1), 3314-3322.

[3]. Zou HY, et al. An orally available small-molecule inhibitor of c-Met, PF-2341066, exhibits cytoreductive antitumor efficacy through antiproliferative and antiangiogenic mechanisms. Cancer Res. 2007, 67(9), 4408-4417.

[4]. Cui JJ, et al. Structure based drug design of crizotinib (PF-02341066), a potent and selective dual inhibitor of mesenchymal-epithelial transition factor (c-MET) kinase and anaplastic lymphoma kinase (ALK). J Med Chem. 2011 Sep 22;54(18):6342-63.

[5]. Cullinane C, et al. Differential (18)F-FDG and 3'-deoxy-3'-(18)F-fluorothymidine PET responses to pharmacologic inhibition of the c-MET receptor in preclinical tumor models. J Nucl Med. 2011 Aug;52(8):1261-7

[6]. Shen A, et al. c-Myc alterations confer therapeutic response and acquired resistance to c-Met inhibitors in MET-addicted cancers. Cancer Res. 2015 Nov 1;75(21):4548-59.

[7]. Umapathy G, et al. The kinase ALK stimulates the kinase ERK5 to promote the expression of the oncogene MYCN in neuroblastoma. Sci Signal. 2014 Oct 28;7(349):ra102.

[8]. Tucker ER, et al. Immunoassays for the quantification of ALK and phosphorylated ALK support the evaluation of on-target ALK inhibitors in neuroblastoma. Mol Oncol. 2017 Aug;11(8):996-1006.