当处理大量样品时，传统ctDNA富集、纯化方法灵敏度有限。因此，本文开发了一种基于离子浓度极化的微流控平台，可在 30 s 内从血清、尿液和粪便等临床样品中，快速、高效地富集和纯化 ctDNA。
同时集成的等温扩增模块可将ctDNA灵敏度提升 100 倍，显著消除了因 ctDNA 丰度低而导致的样本假阴性结果。
其它科普见一种用于液体活检生物标志物(ctDNA)检测的微流控芯片、揭开液体活检技术的神秘面纱(附视频)、液滴微流控技术优势、(视频) 180s 读懂液滴数字 PCR。
(1) ctDNA 富集原理
在 垂直电场 和 阳离子选择性膜 的共同作用下，产生持续的水平驱动力，驱使含有带负电分子 (如核酸、蛋白质) 的流体样品进行富集，受到向下的电渗力(EO)和不断增大的向上的电泳力(EP)，最终使带负电的分子被电捕获，形成离子富集区，并被水平推进，然后被收集起来进行后续扩增分析。
图 1
-
基本机制：
- 电渗力 (EO): 液体因电场作用向下流动（通常由带负电的通道表面吸引正离子，带动液体整体移动）;
- 电泳力 (EP): 带负电的分子（如核酸）在电场中会被吸引到正极（即向上移动）;
- 垂直电场: 在流体样本的垂直方向施加电场，形成两种作用力：
-
动态平衡与富集：初始阶段，向下的电渗力占主导，导致负电分子被液体带动向下。随着电场调整或其他条件变化（如电压升高），向上的电泳力逐渐增强，最终超过电渗力。此时，负电分子被“捕获”在两种力的平衡区域，形成离子富集区。
-
水平驱动与收集：在富集区形成后，通过外部施加的水平驱动力（如流体流动或横向电场），将浓缩的分子带向收集点。这一步骤便于后续的高灵敏度分析（如PCR扩增或蛋白质检测）。
-
阳离子选择性膜(cation-selective permeable membrane)的作用：该膜允许正离子通过而阻挡负离子，可能通过浓差极化效应增强电场局部强度，优化电渗与电泳的平衡，从而提高富集效率。
实际应用场景：常用于快速浓缩微量生物样本（如血液、细胞裂解液），提升检测限，适用于疾病诊断或基因分析等领域。其优势在于无需复杂机械泵送，仅通过电场调控即可实现高效富集。
图 2
(2) 集成式芯片设计
芯片构造原理见 硅、玻璃和石英微流控芯片的制作。
基于上述DNA富集原理，如图 2，作者设计了一集成式芯片。该芯片包含两方面： (1) 富集区，用于从样品中分离和富集核酸; (2) 检测区，用于核酸的恒温扩增和结果读取。两个区域由一个 “Y” 型提取通道连接。
在富集区，多个宽 200 μm 微通道平行排列，以固定一个含有 Nafion 的单层无孔致密层（厚 56 μm）。
图 3
在水平驱动力下，液体样品形成 “阴离子流” 使目标核酸富集，然后在 “Y” 型提取通道处收集（图 3）。随后，“阴离子流”进入检测区，浓缩的核酸经过恒温扩增后即可定量（图 4），剩余溶液被收集在废液储存器中。
数字扩增见 一种微腔式数字微流控芯片、一种集成核酸提取纯化的微腔室数字PCR微流控芯片、一种低样本损失率数字PCR微井阵列微流控芯片。
图 4
为芯片提供水平驱动力，如图 5，作者在芯片中集成一自供能模块。即利用PDMS的透气性在腔内部实现负压完成芯片内部流体运动，详可见一种微腔式数字微流控芯片、一种无样本损失微井数字PCR微流控芯片(附视频)。
图 5
芯片示意图及扩增结果如图 6 所示。
图 6
参考文献
An Ion Concentration Polarization Microplatform for Efficient Enrichment and Analysis of ctDNA
----------------------------------------------------------------
往期精选：
扫一扫
423
被折叠的 条评论
为什么被折叠?
到【灌水乐园】发言
