RNA-RNA pull down实验方法及检测报告

于 2023-07-17 16:53:41 发布
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一．探针准备

1实验目的：构建hsa_circRNA_407176全长载体,以hsa_circRNA_407176质粒全长序列为模板PCR扩增获取含有T7 promoter序列的正义链和反义链DNA，后期作为RNA pull down的探针。

2实验材料

l 主要试剂

试剂名称 试剂来源 cat.No
DL2000 YEASEN 10501ES60
琼脂糖 BIOWEST 111860
PrimeSTAR® MaxDNA Polymerase TAKARA R045Q
DNA回收试剂盒 天根 DP214-02

l 主要仪器及器材

仪器名称 仪器来源 cat. No
凝胶成像仪 美国KODAK Gel Logic 1500
高速离心机 enppendorf 5810R

3基因及载体信息

> hsa_circRNA_407176

l GCAGCTTCAAGGTTACTGACTTTTTATGATGTTTGGTGGCTATGAGACTATAGAAGCATACGAAGATGATCTTTATCGAGATGAGTCATCTAGTGAACTGAGTGTTGATAGTGAGGTGGAATTTCAACTCTATAGCCAAATTCATTATGCCCAAGATCTTGATGATGTCATCAGGGAGGAAGAGCATGAAGAAAAGAACTCTGGGAATTCGGAATCTTCGAGTAGTAAACCAAATCAGAAGAAGCTAATCGTCCTTTCAGATAGTGAGGTCATCCAGCTGTCAGATGGGTCAGAGGTCATCACTTTGTCTGATGAAGACAGTATTTATAGATGTAAAGGAAAGAATGTTAGAGTTCAAGCACAAGAAAATGCCCATGGTCTTTCTTCTTCTCTTCAATCTAATGAGCTGGTTGATAAGAAATGCAAGAGTGATATTGAGAAGCCTAAATCTGAAGAGAGATCAGGTGTAATCCGAGAGGTCATGATTATAGAGGTCAGTTCAAGTGAAGAGGAAGAGAGCACCATTTCAGAAGGTGATAATGTGGAAAGCTGGATGCTACTGGGATGTGAAGTAGATGATAAAGATGATGATATCCTTCTCAACCTTGTGGGATGTGAAAACTCTGTTACTGAAGGTTAGTATCATATTGGCCATTTTGAAAGTAGTATCATCTTTCATAAGGAGGACTGCTTTTCCTAGAGAAAAGACCAATAGGGTCTACTCCGTTTAATTCCTCACTTTTTGGTCTTGTTTTTTGGTTTGTTTCTCATGCGACTCTCTTACCAGTGGCTACTCTAATGGTGGTTTGTCTGAACGTCAGAAAGAGTATGTCAGAATACCAAAGACACTCTGCTTCTGCTGTAAGCAGATTCATAGCTGCTTCTTCCTGTTTGGCTAGAGCCAGTTCTGGACCTGAAATCTTACTTCCCCCCTCTCTCTCTGCTTGGTACCA

l 引物序列

表1 PCR的引物序列（红色部分为T7 promoter序列）

引物名称 引物序列
hs
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