7生物化学与分子生物学——蛋白质结构和功能的关系

7生物化学与分子生物学——蛋白质结构和功能的关系

引言——同源蛋白中的物种差异与生物进化

不同物种中行使相同或相似功能蛋白质称同源蛋白质（homologous proteins）

同源蛋白质中氨基酸序列有明显的相似性，称作同源性（sequence homology）

同源蛋白质的AA序列有许多位置的AA残基对许多物种是相同的，称不变残基（invariant residue）；而有些是不同的，称可变残基（variable residue）

不变的AA残基是蛋白质生物学功能不可缺少的，有的可能参加分子构象维持、电子传递、有的也可能参与信号分子的识别和结合

分子分类方法

通过给生物特定蛋白（如细胞色素C）进行测序后再与相近生物进行比较，此方法做出来的进化树与以形态学为基础的进化树相差无几

蛋白质一级结构与分子病（以镰刀型红细胞贫血病）

镰刀型红细胞贫血病是人类认识最早的一种遗传病，一般来说，纯和致病基因的患者很难存活到成年

镰刀型红细胞由于其自身的特殊构造，很容易在血管狭窄的地方发生堵塞，从而造成一些组织的红肿和疼痛

杂合型病人能提抗疟疾的原因在于，患者血红素由于特殊构造，其在水中的溶解度会较低，容易形成晶体，最终导致细胞破裂，而疟疾是寄生在红细胞内的疟原虫导致的（而且疟原虫进入人体后会干扰人体代谢，导致pH降低，影响血红蛋白对氧的结合），这也就导致了其体内传播的终止

病因

βS指的是疾病基因，βAβS指的是杂合型患者。电泳图显示出镰刀型红细胞贫血病患者的血红蛋白在电泳过程中往正极移动的速度变慢了（荷载负电荷变少）

50年代一位科学家 Ingram 用指纹图谱的方式分析血红蛋白的β亚基，发现患者血红蛋白从氨基末端数第六个氨基酸（正常人是谷氨酸酸性带负电）转变为缬氨酸（中心不带电，所以电泳时跑得慢）

变化是由基因突变引起，通过比较正常人和患者血红蛋白β亚基的序列发现，原本编码谷氨酸的CTT基因由于碱基突变，中间的T变成A，转而编码缬氨酸

突变之后虽然血红蛋白结合氧的能力并没有降低。但是原本血红蛋白表面由苯丙氨酸和赖氨酸这两个疏水氨基酸可以形成一个口袋状的结构（结合氧的情况下，口袋并不形成，但脱氧就会形成），这个口袋中心部位的氨基酸正常人是谷氨酸， 谷氨酸带电荷，口袋是疏水的，所以不结合，而突变成缬氨酸之后，疏水基团之间一结合，造成血红蛋白多聚体的形成，使得血红蛋白在溶液中溶解度大幅度降低，结晶析出，刺破细胞

肌红蛋白（Myoglobin）和血红蛋白（Hemoglobin）的结构与功能

Mb和Hb的结构特点及其辅基血红素

肌红蛋白（X射线晶体衍射技术完成的第一个具有三维结构的蛋白质）主要作用是储存氧和对氧的再分配，这种蛋白质常见于一些能够长期潜水的哺乳动物中（鲸鱼、海豚）；而血红蛋白则是通过不断和呼吸器官进行气体交换达到气体更新的目的

• • • • • 肌红蛋白与血红蛋白是同源蛋白；肌红蛋白是单体蛋白，只有三级结构，AA数153个，二级结构80%以上都是α螺旋，其间少量环状结构连接成8个区段，一个分子结合一个血红素；而血红蛋白β链含有146个氨基酸（α链只有141个氨基酸残基），同样折叠成8段α螺旋，一个亚基结合一个血红素；但是最终三个基团中只有27个相同的氨基酸残基——这也是这两个分子虽然具有类似但具有明确的不同分工的生物学功能的原因之一

人体在不同发育阶段血红蛋白亚基组成是不同的

• • • • • 个体在生长发育不同阶段对氧气需求不同。总的来讲成体HbA结合氧的能力非常强，更适合体重更大的个体生存

• • • • • 而HbF有许多性质与HbA不同，它具有明显的抗酸性和抗碱性，抗原性也很强，最重要的是它在生理条件下对氧的亲和力明显高于HbA，这意味着在任何一定的氧分压情况下，HbA放出氧到HbF上，将氧从母体转移至胎儿的环境中，对处于低氧状态的胎儿极为有利

血红蛋白的结构（成年人），四个亚基，两个β，两个α，每个亚基结合一个血红素，所以这个四聚体形成一个近似球形的结构，中间一个中空的腔

血红素由四个吡咯类亚基组成一个环，环中心为一个亚铁离子。然后以非共价键与血红蛋白结合

• • • • • 正常情况下铁是二价的，具有跟氧结合的能力。铁具有6个配位键，其中4个与卟啉中每一个吡咯的N形成配位键

• • • • • 还有两个配位键，其中一个是和蛋白质中从氨基端开始第93个氨基酸残基（第f段的α螺旋区）——组氨酸的咪唑上的第五个N形成配位键

• • • • • 第六个配位键无论肌红蛋白还是血红蛋白，未跟氧结合时结合的是一个水分子

• • • • • 当结合氧时，氧分子以大约60°角结合在铁的第六个配位键上，原因是蛋白结构中，同位置存在一个组氨酸残基，形成空间位阻

• • • • • 这种空间位阻具有重要意义，原因是血红素在水溶液状态下与一氧化碳的结合非常强（是氧的25000倍），而在蛋白质条件下血红素由于空间位阻与一氧化碳的结合能力下降（大约是氧的250倍）

• • • • • 这种血红素与一氧化碳的结合常常导致人的窒息死亡，但这是原因之一，还有个原因是，一氧化碳会影响线粒体呼吸链中的电子传递过程，阻止能量产生

Mb与Hb的氧合曲线及比较

Mb结合氧公式推导

Hb结合氧公式推导

Hb与Mb氧合曲线比较，在两种蛋白结合氧的饱和度到50%的时候，Mb是2torr，Hb是26torr，即血红蛋白在肺中结合足够的氧气后，到组织中，这时就可以很快释放出一半的氧气供组织消耗，而肌红蛋白只有在组织氧分压十分低的时候才会开始进行氧的释放。这与血红蛋白一个多亚基的结构具有密切关系

Hb的变构效应与O2的运输

血红蛋白存在两种构象

• • • • • 由于血红蛋白是由四个亚基组成的寡聚蛋白质，所以其具有变构效应，这种效应还是同促效应

• • • • • T态（紧张态）——对氧亲和力低

• • • • • R态（松弛态）——对氧亲和力高

• • • • • 当一个血红蛋白中的亚基结合O2后会增加其他未结合O2的亚基对O2的亲和力。这种效应称为正协同性同促效应

• • • • • 一旦一个T状态的亚基结合O2后，它就会促进其他未结合O2的亚基的构象变化，使其都变成R状态——血红蛋白氧合曲线S型的原因：开始时很慢（血红蛋白亚基都处于T状态），慢慢地速度逐渐提高（血红蛋白亚基构象逐一变化）

• • • • • 这种别构效应类似于酶调节自身活性

血红蛋白的亚基装配——状态改变的结构基础

• • • • • 虽然血红蛋白由四个亚基组成，但我们仍然可以将其看作两个圆柱体组成的二聚体（α&β）

• • • • • Fe2+移动时，拖动HisF8残基，并进而引起螺旋F合拐弯EF和FG的位移，这些移动传递到亚基的界面，引发构象的重调，导致四级结构的改变（T→R，利于和氧气结合）

• • • • • • 氧结合后，亚基间交联键的改变

• • • • • α1与β1连接较紧密，称作装配接触

• • • • • α1与β2连接较松动，称作滑动接触

• • • • • α1β1与α2β2之间的接触称为滑动接触，当一个氧分子与一个亚基结合后，会导致这两个半分子之间滑动15°的变化

• • • • • 氧本身是血红蛋白结合的客体（正如酶的底物），也是调节血红蛋白结合氧能力的一种分子，所以我们管这种叫同促的别构调节作用

血红蛋白对氧的结合能力还会受到其他分子的影响

• • • • • 2，3-二磷酸甘油酸，此物质与血红蛋白在正常状态下结合非常牢固（BPG带负电荷，而Hb上多碱性AA），而且在红细胞中，两种物质浓度相差无几（每升4.5毫摩尔）

• • • • • BPG的结合会降低Hb对O2的亲和力（正好促进Hb对O2的释放，与Hb在组织中释放氧气的功能相适应）

• • • • • 胎儿的血红蛋白由成人的β亚基换成了γ亚基，其第143位AA由带正电的组氨酸变成了中性的丝氨酸，与BPG的结合能力下降，最终导致Hb与氧气的结合能力上升，符合胎儿在母体中低氧状态下生命的维持需要

• • • • • 在病理生理缺氧的情况下，为了满足组织细胞对氧的需要，体内BPG的浓度会急剧地增加（代谢性补偿），这种状况可以通过高原反应来体现

H+和CO2促进O2的释放（Bohr效应）

• • • • • 这是一个很重要的反应，降低了由于CO2不溶于血液而产生气泡的风险，此反应产生的氢离子可由Hb结合进行缓冲

• • • • • Bohr效应是指pH对血红蛋白亲和力的影响

• • • • • 组织内部pH偏低，有利于血红蛋白释放氧气，结合CO2和H+；肺泡部，pH升高，氧气分压增高，氧气结合促进CO2排出，与其换气功能一致。这种效应有着重要的意义

总结

氧结合Hb的S形曲线，波尔效应以及BPG效应物的调节使得血红蛋白的输氧能力达到最高效应

同时由于能在较窄的氧分压范围内完成输氧功能，因此使机体的氧水平不会有很大的起伏

此外血红蛋白使机体内的pH也维持在一个较稳定的水平

血红蛋白的别构效应充分地反映了它的生物学适应性、结构与功能的高度统一性