小分子蛋白Western blot 检测

实验概要

 

1.目的  检测小分子蛋白抗体

2.适用范围  单克隆抗体和多克隆抗体

 

实验原理

将经电泳分离的抗原转印到膜上作为固相,利用酶标记的抗抗体以检测已与固相抗原结合的受检抗体

 

 

主要试剂

 

试剂配制

4.1.1  40% Bis-acrylamide with 2.6% C （Acrylamide:Bis, 38.95:1.05）

      丙烯酰胺         77.9g

      双甲叉丙烯酰胺   2.1g

      Total             200ml

4.1.2  30%胶溶液:

0.8    双甲叉丙烯酰胺    0.8g

29.2% 丙烯酰胺          29.2g

        total             100ml

4.1.3  3M TrisHCl , pH 8.45

      36.3g    Trisbase  

      Total    100ml

4.1.4   WG ( water   Glycerol):   

       Water:     58ml

       Glycerol:   36ml

       Total:      94ml

4.1.5    10x Electrophoresis Buffer stock pH8.3 （to make the working buffer, just dilute 10 times. Do not adjust pH , pH should be 8.3.）

Trisbase       60.5g

Tricine        89.5g

SDS          5g

          total          500ml

4.1.6   10% SDS

        SDS    10g

        Total    100ml

4.1.7    2x Laemmli Stacking Buffer pH6.8:

0.25M Tris       15.14g

0.2% SDS        1g or 5ml 20% SDS

          total         500ml

4.1.8  5x Stop Solution (Sample buffer) pH6.7:

Stock:                                    to use:

20% Glycerol      100ml                  take 9.5ml stock        

10% SDS         50g or 250ml 20% SDS    add BME 0.5ml

250mM Tris       15.14g                  bromphenol blue or 

          total           475.00ml                pyronine 4 to taste

4.1.9  transfer buffer                      

48mM Tris base      5.81g

39mM Glycine       2.93g

0.037% SDS         0.375g or 1.875ml of 20% SDS

40% MeOH          400ml

total           1000ml

 

4.1.10  TBST

10mM Tris-HCl, pH7.4

100mM NaCl

0.2% Tween-20

         Total  1000ml

 

文章剩余内容<<<<