目录
1、CDS、cDNA、mRNA、ORF、uORF之间的区别与联系
1、利用CRISPR-Cas9系统编辑uORF来操纵基因翻译
前记
uORF在植物中具有广泛的功能,包括对基因表达的调控、应对各种胁迫、参与发育过程等。uORF通常位于基因组的起始编码子(ATG)上游区域。uORF指的是"upstream open reading frame",它是指与主要翻译产物一起由同一个mRNA分子编码的另一条ORF。uORF的存在可能会影响主要ORF的翻译起始位点和速率,从而影响基因表达。
以下是对植物中uORF功能的简述。
-
调控基因表达:植物中的uORF可以通过抑制CDS的翻译来调节基因表达。uORF在真核生物中广泛存在,并被认为是调节基因表达的重要因素。在植物中,uORF可以通过三种机制调控基因表达:i)uORF抑制CDS的翻译:一些研究表明,含有uORF的mRNA可以通过抑制CDS的翻译来调控基因表达;ii)uORF影响CDS的转录:在一些植物基因中,uORF可以影响CDS的转录,从而对基因表达产生影响;iii)uORF调节CDS的稳定性:一些研究表明,uORF可以调节CDS的稳定性,从而影响基因表达。
-
应对各种胁迫:植物生长发育过程中,会遭受不同的胁迫,如干旱、高盐、低温等。uORF在这些胁迫下发挥了重要的生理作用。研究表明,一些含有uORF的mRNA可以在环境压力下迅速合成,从而使植物在应对胁迫时能够更快地响应。例如,一些研究表明,一些uORF可以在高盐胁迫下抑制CDS的翻译,从而减少蛋白质的合成,节省能量。
-
参与发育过程:uORF在植物的发育过程中也发挥着重要的作用。一些研究表明,含有uORF的基因在植物生长发育过程中发挥了调节作用。例如,一些uORF可以影响植物的生长速度、植株开花时间等。
总之,uORF在植物中具有广泛的功能,包括对基因表达的调控、应对各种胁迫、参与发育过程等。未来的研究将有助于更好地理解uORF在植物中的功能,以及它们在植物生长发育和应对胁迫中的作用。
一、基本知识
1、CDS、cDNA、mRNA、ORF、uORF之间的区别与联系
CDS(Coding sequence)是指基因组DNA或转录本中的编码区域,从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAA,TAG,TGA)之间的一段序列,可以被转录成mRNA并且在翻译过程中被翻译成蛋白质。
cDNA(complementary DNA)是通过反转录过程在mRNA模板上合成的DNA,是基于已经存在的mRNA序列合成的一种DNA,其中不包含非编码RNA翻译后不参与蛋白质合成的序列,可以反映出基因表达水平。
mRNA(messenger RNA)是从DNA进行转录过程生成的一种单链RNA,它携带着从基因组中的DNA序列中生物学信息,将其传递到蛋白质的合成中。
ORF(open reading frame)是指从起始密码子到终止密码子之间的一段序列,这段序列是可以被翻译成蛋白质的,而且其中不包括起始和终止密码子。
uORF(upstream open reading frame)指的是存在于mRNA 5’端的uORF,也是一段可以被翻译成蛋白质的ORF,是在mRNA翻译过程中常见的一种调控机制,可以影响下游主要ORF的翻译效率。
这些概念之间有如下联系和区别:
- CDS、cDNA和mRNA之间的关系很密切,它们都与基因表达和蛋白质合成有关;
- CDS是基因组DNA或转录本中编码区域,而cDNA是从mRNA反转录得到的DNA,mRNA是从DNA转录生成的;
- ORF和uORF是与具体序列的结构和功能有关,其中ORF是可以被翻译成蛋白质的序列,而uORF则通常被认为是可以影响下游主要ORF翻译效率的序列;
- 要区分它们,可以从它们的定义、作用、位置等方面入手。CDS、cDNA和mRNA之间的区别可以从它们的来源和结构入手,ORF和uORF之间的区别可以从它们在mRNA序列中的位置和作用入手。
2、uORF与ORF的区别
ORF是开放阅读框,指在DNA或RNA序列中存在的且能够被翻译成蛋白质的连续序列。而uORF是在mRNA 5'非翻译区域(5' UTR)中的小型ORF,通常与主要的ORF相对面,它在翻译时会在主ORF之前被翻译成蛋白质。因此,uORF可以通过调控主ORF的翻译来影响基因表达。简单来说,uORF是ORF的一种特殊形式,它通常发挥着不同于主ORF的生物学功能。
二、植物中uORF的预测工具
1、uORFlight
uORFlight是一个数据库,主要研究真核生物mRNA中上游开放阅读框(uORFs)的变异与翻译调控。该数据库提供了拟南芥和水稻基因在不同剪接模式下uORF变异的探索途径,并且用户可以在群体范围内评估不同基因型中uORF的频率,从而在数据库或简单实验中找出与表型变异相关的SNP或INDEL。这些信息有助于基于同源mORF功能构建植物发育或适应环境的uORF功能假设,并且该数据库还收集了植物uORF相关文献。此外,uORFlight还将uORF注释扩展到更多物种,包括真菌、植物、动物和脊椎动物,从而更广泛地研究uORF基因变异如何决定表型多样性,并推进我们对真核生物翻译调控机制的理解。
uORF database,uORFlight,translational control,uORF review,uORF variat (rnairport.com)http://www.rnairport.com:443/home.html#uORFlight网站首页界面如下所示:
点击菜单栏uORF view的Other species选项,可以根据目的物种的基因ID号搜寻是否含有uORF序列,输入对应物种的基因ID号并选择相应的物种进行搜索。
也可以根据序列进行搜索,点击菜单栏Tool的uORF finder选项,输入目的序列进行搜索。
2、PsORF
PsORF网站是一个基因组学数据库,提供了大量的短开放阅读框(short open reading frames, sORFs)的信息。这些sORFs是指长度在5到100个氨基酸的蛋白质编码序列,它们往往被忽视或被误认为是RNA编码区域。然而,近年来的研究表明,这些sORFs可能具有重要的生物学功能,如参与基因表达调控等。
PsORF网站收集了来自多个物种的sORFs的序列信息,并提供了详细的注释,包括基因名称、起始和终止密码子、氨基酸序列、启动子元件以及翻译起始位点等信息。用户可以通过搜索关键词或浏览物种分类来查找感兴趣的sORFs。此外,网站还提供了一些工具,如序列比对、同源性搜索和基因表达数据的查询等,方便用户进行更深入的研究。
PsORF网站为生物学家和基因组学研究人员提供了一个重要的资源,可以帮助他们发现新的生物学功能和提高对基因组编码区域的理解。
PsORF Database (whu.edu.cn)http://psorf.whu.edu.cn/#/网站的界面如下所示,在网站首页直接键入查找的基因ID号uORF名称,即可完成搜索。
此外,也可以根据物种进行查找,点击SEARCH选项,选择对应的物种,输入基因ID号,可查询该基因是否有对应的uORF。
三、植物中uORF的研究方法
1、利用CRISPR-Cas9系统编辑uORF来操纵基因翻译
1.1、uORF的预测的原则
(1)具有起始和终止密码子;起始密码子包括:AUG、ACG、CUG、 UUG,终止密码子包括:
1.2、uORF的种类
依据所处位置和数目,uORF的种类可分为以下几种:
1.3、uORF的功能验证
主要分为以下两个过程:
(1)使用LUC实验验证uORF序列的活性,是否影响LUC基因的表达;
(2)若LUC实验结果为影响LUC基因表达,则使用CRISPR-Cas9系统编辑uORF序列,产生突变体,研究其翻译和表型是否受到了影响。
2、引入uORF影响下游基因翻译
3、通过碱基编辑来扩展原始的uorf
通过以上方法,可以实现:
(1)产生具有不同活性的uORFs
(2)获得具有预期数量性状的突变体
四、参考文献
1、2020-Database (Oxford)-uORFlight: a vehicle toward uORF-mediated translational regulation mechanisms in eukaryotes
uORFlight: a vehicle toward uORF-mediated translational regulation mechanisms in eukaryotes | Database | Oxford Academic (oup.com)https://academic.oup.com/database/article/doi/10.1093/database/baaa007/5788724?login=true2、2020-PBJ-PsORF: a database of small ORFs in plants
PsORF: a database of small ORFs in plants - Chen - 2020 - Plant Biotechnology Journal - Wiley Online Libraryhttps://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/pbi.133893、2023-NAR-A novel active transposon creates allelic variation through altered translation rate to influence protein abundance
A novel active transposon creates allelic variation through altered translation rate to influence protein abundance - PubMed (nih.gov)https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36629271/4、2022-PNAS-Variation in upstream open reading frames contributes to allelic diversity in maize protein abundance
5、2020-NP-Manipulating gene translation in plants by CRISPR–Cas9-mediated genome editing of upstream open reading frames
Manipulating gene translation in plants by CRISPR–Cas9-mediated genome editing of upstream open reading frames | Nature Protocolshttps://www.nature.com/articles/s41596-019-0238-36、2023-NBT-Tuning plant phenotypes by precise, graded downregulation of gene expression
后记
植物中uORF序列是调控基因表达的重要区域,研究表明,大部分的物种都含有或多或少的uORF序列,它们通过调控下游基因的翻译从而影响植物的性状。目前关于uORF的研究,中国科学院遗传发育所高彩霞研究员做出了很前沿的工作,本文主要参考了他们的研究结果。
2023.9.24
----CXGG