帕唑帕尼 (GW786034) 是一种新型多靶点抑制剂 |MedChemExpress (MCE)

中文名：帕唑帕尼

CAS：444731-52-6

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：帕唑帕尼 (GW786034) 是一种新型多靶点抑制剂，可抑制 VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、PDGFRβ、c-Kit、FGFR1 和 c-Fms，IC50 为 10，分别为 30、47、84、74、140 和 146 nM。 IC50 和目标：IC50：10 nM (VEGFR1)、30 nM (VEGFR2)、47 nM (VEGFR3)、74 nM (c-Kit)、84 nM (PDGFRβ)、140 nM (FGFR1)、146 nM (c-Fms) )[1]  

体外：Pazopanib 显示出对所有人类 VEGFR 受体的良好效力，对 VEGFR-1、-2 和 -3 的 IC50 分别为 10、30 和 47 nM。还观察到对密切相关的酪氨酸受体激酶 PDGFRβ、c-Kit、FGF-R1 和 c-fms 的显着活性，IC50 分别为 84、74、140 和 146 nM。在细胞试验中，除了抑制 VEGF 诱导的 HUVEC 增殖外，Pazopanib 还有效抑制 VEGF 诱导的 HUVEC 细胞中 VEGFR-2 的磷酸化，IC50 约为 8 nM。帕唑帕尼在大鼠、狗和猴子中具有良好的药代动力学，分别在 10、1 和 5 mg/kg 时具有低清除率 (1.4-1.7 mL/min/kg) 和良好的口服生物利用度 (72%、47%、65%)。除了 2C9 (7.9 μM)[1] 外，细胞色素 P450 谱也得到改善，对测试的同工酶的抑制 >10 μM。

体内：用 100 mg/kg 的 Pazopanib 处理小鼠，每天两次，持续 5 天，导致血管形成程度的显着抑制。使用 HT29（结肠癌）、A375P（黑色素瘤）和 HN5（头颈癌）肿瘤后，在携带已建立的人异种移植物 (200−250 mm3) 的小鼠中检查帕唑帕尼的抗血管生成活性标准的三周疗程。与 A375P 模型相比，HN5 和 HT29 异种移植物在所有剂量下的反应都更好，A375P 模型历来对 VEGFR-2 抑制剂具有更强的耐药性。作为支持观察到的异种移植物生长抑制是通过抗血管生成而非抗肿瘤机制发挥作用的证据，在低于 10 μM 的浓度下未观察到帕唑帕尼对这些在含血清培养基中生长的人类肿瘤细胞系（HT29、HN5、A375P）的抗增殖活性。未观察到对小鼠体重的显着影响，并且在整个研究期间动物看起来健康且活跃[1]。帕唑帕尼滴眼液组粘附的白细胞数量低于未治疗的糖尿病动物，高于健康动物。粘附在健康动物视网膜脉管系统上的平均白细胞为 37.2±7.8，而糖尿病动物的平均值为 102±15.6，比健康动物高约 3 倍。用 0.5 % w/v 帕唑帕尼混悬液处理的动物在其视网膜血管系统中粘附了 69.5±9.5 个白细胞，这明显低于糖尿病动物[2]。

激酶试验：VEGFR1、VEGFR2 和 VEGFR3 的 VEGFR 酶测定在 384 孔微量滴定板中以均质时间分辨荧光 (HTRF) 形式运行，使用纯化的杆状病毒表达的谷胱甘肽-S-转移酶 (GST) 融合蛋白，编码催化 c-人 VEGFR 受体激酶 1、2 或 3 的末端。通过添加 10 μL 活化的 VEGFR2 激酶溶液（终浓度为 1 nM 酶于 0.1 M 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸中）来启动反应（ HEPES)，pH 7.5，含 0.1 mg/mL 牛血清白蛋白 (BSA)、300 μM 二硫苏糖醇 (DTT)] 至 10 μL 底物溶液 [终浓度，360 nM 肽，(生物素-氨基己基-EEEEYFELVAKKKK-NH2)，75 μM ATP、10 μM MgCl2]和 1 μL 滴定化合物的 DMSO 溶液。将板在室温下孵育 60 分钟，然后通过添加 20 μL 100 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA) 猝灭反应。淬灭后，添加 20 μL HTRF 试剂（终浓度，15 nM 链霉亲和素连接的别藻蓝蛋白、1 nM 铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体，稀释于 0.1 mg/mL BSA、0.1 M HEPES，pH 7.5），并将板孵育至少 10 分钟。 10分钟使用 Wallac Victor 酶标仪测量 665 nM 的荧光，使用 50 μs 的时间延迟[1]。

细胞试验：使用市售试剂盒，使用 5-溴-2-脱氧尿苷 (BrdU) 掺入法测量帕唑帕尼对细胞增殖的影响。将 HUVEC 接种在 1 型胶原包被的 96 孔板中含有 5% 胎牛血清 (FBS) 的培养基中，并在 37°C、5% CO2 下孵育过夜。从细胞中吸出培养基，并将不同浓度的帕唑帕尼的无血清培养基添加到每个孔中。 30 分钟后，将 VEGF (10 ng/mL) 或 bFGF (0.3 ng/mL) 添加到孔中。将细胞再孵育 72 小时，并在孵育的最后 18 至 24 小时期间添加 BrdU (10 μM)。孵育结束时，通过 ELISA 测量细胞中 BrdU 的掺入情况。数据符合方程 y=Vmax(1−(x/(K+x))) 描述的曲线，其中 K 等于 IC50[1]。

动物体内实验:小鼠[1] 通过在 8-12 周龄裸鼠中注射肿瘤细胞悬液来引发肿瘤。当肿瘤体积达到 100−200 mm3 时，小鼠被随机分为 8 组。帕唑帕尼每天给药一次或两次，剂量为 10、30 或 100 mg/kg。研究完成后，通过吸入二氧化碳对动物实施安乐死。每周两次用卡尺测量肿瘤体积，使用等式：肿瘤体积(mm 3 )=(长度×宽度2)/2。结果通常报告为％抑制=1-（药物治疗群体的平均生长/媒介物治疗的对照群体的平均生长）。大鼠[2] 体重200至250克的雄性棕色挪威（BN；有色）大鼠在任何实验程序之前至少适应环境两天。禁食过夜 12-16 小时后，腹腔注射 30 mg/mL 链脲佐菌素的 10 mM 柠檬酸盐缓冲液（pH 4.5）溶液（60 mg/kg 体重）以诱导糖尿病。注射链脲佐菌素3-4小时后，使动物常规饮食，注射链脲佐菌素后24小时，通过尾静脉收集血样(5-10μL)。用血糖监测仪测定动物的血糖水平。血糖水平高于 250 mg/dL 的动物被视为糖尿病。这些动物分为三组。第 1 组：健康 (n=12)，第 2 组：糖尿病患者 (n=12)，第 3 组：糖尿病+治疗 (n=12)。糖尿病诱导后立即开始治疗。两只眼睛每天两次使用 0.5% w/v 帕唑帕尼悬浮液（每只眼睛体积 10 μL）给药，持续 30 天，并在第 31 天、第 30 天最后一次给药后 16-17 小时处死所有组中的动物。

 参考详情：www.medchemexpress.cn/Pazopanib.html

参考文献：

[1]. Harris PA, et al. Discovery of 5-[[4-[(2,3-dimethyl-2H-indazol-6-yl)methylamino]-2-pyrimidinyl]amino]-2-methyl-benzenesulfonamide (Pazopanib), a novel and potent vascular endothelial growth factor receptor inhibitor. J Med Chem. 2008, 51(15), 4632-4640.[2]. Thakur A, et al. Pazopanib, a multitargeted tyrosine kinase inhibitor, reduces diabetic retinal vascular leukostasis and leakage. Microvasc Res. 2011 Nov;82(3):346-50.