Tofacitinib 是一种可口服的 JAK3/2/1 抑制剂 |MedChemExpress (MCE)

中文名：托法替尼

CAS：477600-75-2

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Tofacitinib 是一种可口服的 JAK3/2/1 抑制剂，IC50 分别为 1、20 和 112 nM。 IC50 和目标：IC50：1 nM (JAK3)、20 nM (JAK2)、112 nM (JAK1)[1] 

体外：Tofacitinib (CP-690550) citrate 可能结合 JAK3 和 JAK2，分别为 2.2 nM 和 5 nM (Kd)。该报告包括在 Camk1（Kd 为 5,000 nM）、DCamkL3（Kd 为 4.5 nM）、Mst2（Kd > 4,300 nM), Pkn1 (Kd 200 nM), Rps6ka2 (Kin.Dom.2-C-terminal) (Kd 1,400 nM), Rps6ka6 (Kin.Dom.2-C-terminal) (Kd of 1,200 nM), Snark (Kd of 420 nM), Tnk1 (Kd< /sub> 640 nM) 和 Tyk2 (Kd 620 nM)[1]。

体内：与 PEG 处理的对照小鼠相比，用托法替尼处理的动物抗药抗体 (ADA) 的产生显着降低（初始免疫后五周，p<0.01，n=8）。此外，最早在第 28 天可检测到 ADA。从第 21 天到第 35 天，SS1P 的效价分别明显不同 1000 到 200 倍。与 SS1P 相比，注射匙孔血蓝蛋白 (KLH) 的小鼠产生更快速的抗体反应。然而，与对照组相比，托法替尼的给药降低了抗 KLH 滴度（第 21 天 p<0.05，第 28 天 p<0.01，n=5）。从第 21 天到第 28 天，滴度分别降低了 5000 到 250 倍[2]。根据之前的剂量反应研究，选择了 6.2 mg/kg 的 Tofacitinib 日剂量以抑制 80% 的后爪体积和血浆暴露，能够抑制 JAK1 和 JAK3 信号通路 >4 小时[3 ]。

激酶试验：通过对融合到专有标签的选定激酶进行竞争结合测定来记录激酶活性。在测试化合物（例如托法替尼）存在和不存在的情况下，对与固定的活性位点定向配体结合的激酶量的测量提供配体结合的DMSO对照的％。选择 0 到 10 之间的活性进行 Kd 测定。树状图表示是由名为 PhyloChem[1] 的内部可视化工具生成的。

细胞试验：通过磁力分离（CD4+ MACS 珠）从健康供体获得的外周血单核细胞中富集人类 CD4+ 阳性细胞。使用板结合的抗 CD3 和抗 CD28 抗体（各 5 ug/mL）将 CD4+ 细胞激活 3 天，然后在 IL-2 (50 U/mL) 存在的情况下再扩增 4 天。细胞在 1% RPMI 中静置过夜，并与托法替尼或 DMSO 对照以指定浓度（5 nM、50 nM、500 nM；DMSO 浓度在所有制剂中相同）预孵育 1 小时，然后用 IL-2 激活（ 1000 u/mL) 或 IL-12 (100 ng/mL) 15 分钟。将细胞（10×106/条件）在 1% Triton-x 裂解缓冲液中裂解，并在 NuPage Bis-Tris 凝胶（4-12% 梯度）中运行等量的细胞裂解物。蛋白质被转移到硝酸纤维素膜上。使用 Odyssey 蛋白质印迹系统 [1] 对指定抗体进行检测。

动物体内实验:小鼠[2] 使用雌性 BALB/c 小鼠（6-8 周龄）。小鼠通过渗透泵输注接受托法替尼 PEG300 (100 mg/mL) 或单独载体 (PEG300)（Alzet Model 2004，0.25 μL/小时，28 天）。免疫前四天，将小鼠麻醉并剃去其背部表面的毛。在背部切一个一厘米的切口，形成皮下口袋并插入泵。用伤口夹封闭切口部位。从第 0 天开始，每周 (ip) 给小鼠注射 SS1P 重组免疫毒素 (RIT；5 μg/小鼠)；对照小鼠仅接受盐水注射。 SS1P或载体免疫前每周抽取50μL血液以获得血清样本。血清储存于-80°C直至分析。 大鼠[3] 在雌性Lewis大鼠中诱导佐剂诱导性关节炎(AIA)。根据后爪体积对大鼠进行随机分组，并分配至托法替布或载体治疗方案。每个治疗组 7-8 只大鼠和正常幼鼠（每组 n=4）在开始治疗后 4 小时、4 天或 7 天（分别为免疫后第 16、20 和 23 天）处以安乐死。托法替尼悬浮于 0.5% 甲基纤维素/0.025% Tween 20 中用于体内研究。免疫后第 16 天开始每日一次口服赋形剂或托法替尼 (6.2 mg/kg)，并持续至第 23 天。治疗开始后 4 天和 7 天（分别为免疫后第 20 天和 23 天）重新评估爪体积）。对于微计算机断层扫描 (micro-CT) 成像以及爪组织中的抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染色，在单独的 Lewis 大鼠组中诱导 AIA。

 参考详情：www.medchemexpress.cn/Tofacitinib.html

参考文献：

[1]. Calama E, et al. Tofacitinib ameliorates inflammation in a rat model of airway neutrophilia induced by inhaled LPS. Pulm Pharmacol Ther. 2017 Apr;43:60-67.

[2]. LaBranche TP, et al. JAK inhibition with tofacitinib suppresses arthritic joint structural damage through decreased RANKL production. Arthritis Rheum. 2012 Nov;64(11):3531-42.[3]. Onda M, et al. Tofacitinib suppresses antibody responses to protein therapeutics in murine hosts. J Immunol. 2014 Jul 1;193(1):48-55.

[4]. Jiang JK, et al. Examining the chirality, conformation and selective kinase inhibition of 3-((3R,4R)-4-methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino)piperidin-1-yl)-3-oxopropanenitrile (CP-690,550). J Med Chem. 2008 Dec 25;51(24):8012-8.