描述:
将罗丹明(RBITC)修饰到人转铁蛋白上是一种常用的荧光标记方法,用于生物分析和细胞成像等研究。以下是一般的标记步骤:
材料准备
- 人转铁蛋白:*的人转铁蛋白,确保其纯度和活性。
- 罗丹明(RBITC):购买高纯度的RBITC荧光染料。
- 碳酸氢钠缓冲液:用于制备标记反应的缓冲液。
- 甲醛:用作反应过程中的固定剂。
- 其他试剂和耗材:如离心管、搅拌器等。
标记步骤
- 准备转铁蛋白溶液:将人转铁蛋白溶解在碳酸氢钠缓冲液中,确保其浓度适合标记反应。
- 制备RBITC溶液:将RBITC溶解在适量的溶剂中,制备成适当浓度的溶液。
- 标记反应:将适量的RBITC溶液缓慢加入到转铁蛋白溶液中,同时轻轻搅拌。加入甲醛固定反应。
- 孵育:在室温或4°C下孵育一段时间,通常为1-2小时,以促进RBITC与转铁蛋白的结合。
- 去除未反应的RBITC:使用透析袋或凝胶过滤柱去除未反应的RBITC。
- 纯度和活性检测:检测标记后的RBITC-转铁蛋白的纯度和活性,确保其可以用于后续实验。
应用和保存
标记后的RBITC-转铁蛋白可用于细胞成像和生物学研究中。存储时应避光、冷藏保存,以保持其稳定性和活性。这种方法可以用于研究铁蛋白在细胞和组织中的分布和功能,以及铁代谢相关疾病的诊断和*方法的开发。
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