Cell：质谱流式细胞技术揭示阿片类药物成瘾的细胞真凶

阿片类药物在医疗上用于缓解疼痛，有镇痛和中枢神经的抑制作用。但阿片类药物使用不当或将阿片类药物当作毒品使用，往往会导致使用者对药物产生依赖性乃至上瘾。

来自厦门大学医学院的研究团队在《Cell》（IF=64.5）发表了题为“Opioid-induced fragile-like regulatory T cells contribute to withdrawal”的文章，本研究主要使用质谱流式细胞技术（Mass Cytometry，CyTOF）检测了阿片类药物使用障碍患者的外周血样本，对患者外周免疫环境进行了深入分析，从复杂的细胞环境中找到了细胞真凶。 

01  CyTOF发现阿片类药物使用患者的脆弱性Tregs细胞亚群

本研究使用了CyTOF对21例阿片类药物使用障碍患者的PBMC进行了检测，共得到13个细胞亚群。与对照组相比阿片类药物使用患者的CD4+和CD8+ 中枢记忆细胞的比例明显增加，同时作者在此发现了INF-γ+细胞频率在阿片类药物使用障碍患者中增加，而这种INF-γ+细胞的增加主要来源于Tregs细胞亚群。这种表达IFN-γ的细胞被称为脆弱性Treg细胞。

图1：阿片类药物使用障碍患者外周微环境中出现脆弱性Tregs细胞亚群

02  CyTOF发现阿片类药物使用患者的脆弱性Tregs细胞亚群

为了确定阿片类药物使用障碍患者的发病机制，作者使用阿片类药物—吗啡对小鼠进行刺激，发现在吗啡处理的小鼠伏隔核（NAc）中，不对称突触的数量增加，同时突触的活跃区长度减少，这个结果解释了吗啡刺激后兴奋性突触功能减弱的原因。

作者为了确定IFN-γ是否影响NAc的突触可塑性，在吗啡刺激前给小鼠注射了IFN-γ的中和抗体，作者发现抑制IFN-γ并不能减少Tregs细胞的浸润，但是可以有效降低NAc中IFN-γ的水平。在降低IFN-γ后突触的活跃区明显增长，这表明突触的功能增强。

图2：抑制IFN-γ可以缓解吗啡导致的突触功能减弱

03  阿片类药物促进Ccl2介导的Tregs细胞亚群的募集

在发现了脆弱性Tregs细胞亚群释放的IFN-γ会导致突触的功能减弱后，Treg细胞如何渗入NAc中的问题则显得尤为重要。作者针对Ccl2、Ccl19和Ccl21的表达情况进行了研究（这三个趋化因子是参与Treg运输的潜在候选趋化因子），结果显示NAc中的Ccl2在吗啡治疗后表达升高，同时在Ccr2敲除小鼠中Tregs细胞浸润明显减少，以上结果表明吗啡会刺激神经元Ccl2的表达并募集Tregs细胞亚群。

图3：Ccl2介导NAc部位的Tregs细胞亚群募集 

04  Fabp7对阿片类药物相关的血脑屏障通透性至关重要

RNA-seq结果显示：与对照组相比，吗啡刺激后NAc中存在248个显著差异基因，其中存在下调基因Fabp7的表达与IFN-γ水平有着明显的相关性。作者在小鼠NAc部位注射Fabp7过表达病毒，发现Fabp7的表达升高显著降低了NAc中IFN-γ的水平，而血液中的IFN-γ水平则不受影响。这个结果证明，Fabp7下调会导致血脑屏障的损坏，为脆弱性Tregs细胞亚群进入脑部打开了通道。

图4：Fabp7下调导致血脑屏障损坏

总结与讨论

本研究通过CyTOF检测阿片类药物使用障碍患者外周血样本中的41个蛋白，发现了导致阿片类药物使用障碍的重要细胞亚群（脆弱性Tregs亚群），并通过转录组学对Tregs细胞亚群进入脑部的机制进行了深入研究。最终得出结论：阿片类药物刺激会导致血脑屏障的损坏，而脑部释放的趋化因子Ccl2会吸引脆弱性Tregs细胞亚群进入脑部释放IFN-γ，最终导致NAc部位突触的功能异常。

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相关文献

Zhu Y, Yan P, Wang R et al.Opioid-induced fragile-like regulatory T cells contribute to withdrawal. Cell. 2023 Feb 2;186(3):591-606.e23.

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