
欢迎分享本文到朋友圈,文章转载、投稿、业务合作联系请微信Havana90~~ Western blot可以用于蛋白含量的测定,对其进行(半)定量分析。我们在论文中经常会看到除了Western blot条带图片之外,还会附带一个条带量化分析的柱状图,更为直观和客观地展示表达量的差别。
图源: Wiel C, Le Gal K, Ibrahim M X, et al. BACH1Stabilization by Antioxidants Stimulates Lung Cancer Metastasis[J]. Cell, 2019. 这种图的数据一般是通过Image J或者IPP等位图分析软件获得的。在Image J里面量化分析Western blot条带的方法有两种,一种是“面积法”,一种是“反相加和灰度法”。一般情况下,这两种方法测量的都不是光密度,需要校正之后才会测到光密度。但是没关系,这两种方法测得结果和光密度之间存在线性对应关系,都可以对Western blot结果进行(半)定量描述。 01 面积法 所谓面积法,是Image J通过扫描Western bolt条带的灰度值变化,综合考虑灰度值和面积,画出一条带峰的曲线,然后以峰面积来表示蛋白表达量。

1.打开需要测量的图片或者Image J自带的例图,本文使用自带例图;

2.对图片进行整体的基础调整:颜色模式改为8bit灰度模式、色阶调整; 8bit的单通道灰度模式是绝大多数计算和命令所需要的前提处理,不改成这模式进行后续处理会有报错提示。转变成8 bit之后