前两天提到了最近在尝试HISAT2+Stringtie+DESeq2 的组合,感觉还是蛮好用的,deseq2的功能颇多,hisat2+stringtie的处理速度又快,是我现在最喜欢用的RNA-seq处理流程。
hisat2 和 stringtie 都可以在anaconda上直接安装,deseq2可以使用新的Bioconductor的安装方式:
if (!requireNamespace("BiocManager", quietly = TRUE))
install.packages("BiocManager")
BiocManager::install("DESeq2", version = "3.8")
预处理:
和其他数据处理一样,先把sra文件转为fastq,可以使用seqtk对fastq进行自动的trim,但还是要先用FASTQC先看一下质量,太差的数据最好还是不要用。
同时还需要注释文件和基因组文件,下载地址:
iGenomes
这回我粗暴一点,直接给代码:
hisat2:
hisat2 -t -x /ref/mm10