电路非门_利用CRISPRdCas9或非门构建酵母细胞中的数字逻辑电路

天然的遗传电路使细胞能够做出复杂的数字决策，想要在真核生物中建立同样复杂的合成电路，就不得不面对泄漏问题。许多基于CRISPR-dCas9设计的逻辑电路利用gRNA引导dCas9结合启动子，产生空间位阻，从而阻止RNA聚合酶的结合，进一步抑制了转录。然而仅靠空间位阻产生的转录抑制能力不够强，容易发生泄漏。在这篇文章中，作者将dCas9与染色质重塑抑制域Mxi1融合，在真核细胞中构建了NOR门和级联电路，与通过空间位阻的抑制相比，这种抑制提供了显着改善和更一致的“OFF”信号并显示出很小的泄漏。

图1. (a)NOR门输入级由Pol II pGRR启动子组成，该启动子被其同源gRNA-dCas9-Mxi1复合物之一或两者的结合完全抑制。NOR门的输出是一个gRNA转录本，两侧是自切割核酶(RGR)。切割位点由红色箭头指示，核酶的切割阻止了gRNA的核输出，如虚线灰色箭头所示。(b)NOR门库的构建过程。库由一组400个双输入pGRR启动子和20个RGR输出组成，总共8,000个可能的NOR门。(c)在基因组上将NOR门整合到酿酒酵母中。(d通过将多个或非门集成到一个应变中来构造任意电路。<