ctab提取dna流程图_ctab 提取dna配方

ctab 提取dna配方

(5页)

本资源提供全文预览，点击全文预览即可全文预览,如果喜欢文档就下载吧，查找使用更方便哦！

19.90 积分

CTABCTAB十六烷基三甲基溴化铵 别称:西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵，鲸熔三甲基溴化铵； CTAB；CTMAB；HTAB；CTABr；阳性皂 英文名 Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide；Cetrimonium Bromide 分类 季铵盐 分子式 C16H33(CH3)3NBr 分子量 364.446 熔点：250-237℃ 溶解性：13 g/L (20°C) 密度：1.3220 g/ml CTAB 提取缓冲液： 100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0)，20 mmol/L EDTA- Na2，1.4mol/LNaCl(如表 1)，2% CTAB，使用前加入 0.1%(V/V)的 β-巯基乙醇。提提取取 D DN NA A 配配方方CTAB 为十六烷基三甲基溴化铵， CTAB 提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境 ,防止核酸被破坏； EDTA 螯合 Mg2+或 Mn2+离子,抑制 DNase 活性； NaCl 提供一个高盐环境 ,使 DNP 充分溶解,存在于液相中； Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂 ,有效地防止酚氧化成醌 ,避免褐变,使酚容易去除 基因 组 DNA。 CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml，先用 70ml ddH2O 溶解, 再定容至 200ml 灭菌 冷却后 0.2-1% 2-巯基乙醇(400ul)氯仿-异戊醇(24：1)：先加 96ml 氯仿， 再加 4ml 异戊醇，摇匀即可。 提提取取 R RN NA A 配配方方2% CTAB(W/V) 2% 聚乙烯吡咯烷酮 PVP(W/V) 100 mM Tris-HCl(pH8.0,DEPC 处理的水配置) 25mM EDTA 0.5g/L 亚精胺 Spermidine 2.0M NaCl，2%巯基乙醇( V/V，使用前加入) 由于在高温灭菌条件下， Tris-HCl 要和 DEPC 发生反应，所以配 RNA 提取缓冲 液时直接用 DEPC 处理的水配制即可。CTAB 法法提提取取植植物物 D DN NA ACTAB 提取缓冲液配方：1mM Tris-HCl ( PH8.0)；20mM EDTA( PH8.0)；1.4 M NaCl；2% CTAB(W/V) ；2% 聚乙烯吡咯烷酮 PVP(W/V) 。(1)取材料(3 片叶)移入 1.5 ml Eppendorf 管中，迅速加液氮研磨成粉末状； (2)加入 600 μl 的 CTAB 提取缓冲液(CTAB 在 65℃水浴预热) ，加 3 μl β-巯基乙醇 (0.2-1%) ，混匀，60-65℃水浴 30min-1h。每 5min 轻轻摇动几次，开始可以颠倒， 后期轻缓； (3)30min 后，加入 1/3V 的 5M KAc 混匀冰浴 30min，4℃，12000 r/min，离心 15 min； (4)小心吸取上清液，移入新的 1.5 ml Eppendorf 管中，加入等体积的冷冻 氯仿-异戊醇 (24：1)，混匀，4℃，12000 r/min，离心 10 min。 (5)重复步骤(4)1-2 次，以蛋白层不出现为止； (6)取上清，加等体积冷冻异丙醇，混匀，-20℃沉淀 40min，4℃，12000 r/min，离心 10 min； (7)弃去上清液，用 70%乙醇洗涤沉淀 1-2 次，12000 r/min，离心 10 min； (8)室温下干燥后(一般干燥 5-15 min) ，溶于 20-30 μl 去离子水中，加 1μl RNase (10μg /μl，终浓度 10μg /ml) ，37℃水浴保温 30 min，于-20℃或者-70℃下保存备 用。若要纯化 DNA，可做下列操作 (9)加入等体积 冷 氯仿-异戊醇(24：1)，混匀，4℃，12000 r/min，离心 10 min。 (10)取上清，加 1/10V 3M NaAc(pH5.2)和 2V 冷冻无水乙醇，混匀，-20℃沉淀 40min，4℃，12000 r/min，离心 10 min； (11)弃去上清液，用 70%乙醇洗涤沉淀 1-2 次，12000 r/min，离心 10 min； (12)超净台上晾干(吹干) ，用 20-30μl 去离子水溶解，-20℃或者-70℃下保存。 关 键 词： ctab 提取 dna 配方

 天天文库所有资源均是用户自行上传分享，仅供网友学习交流，未经上传用户书面授权，请勿作他用。