ctab提取dna流程图,CTAB法--DNA提取

实验步骤

1.称取0.1g左右的植物组织，放入2ml离心管，加入600ul的DNA提取缓冲液

(Buffer ①+Buffer②+Buffer③+Na2HSO3)。

2.研磨彻底，65℃水浴50min，中间每隔15分钟颠倒混匀一次。

3.加入600ul的氯仿/异戊醇24:1，颠倒混匀。

4.14000rpm离心10min，取上清液500ul左右到新的1.5ml离心管。

5.加入等体积的异丙醇(约500ul)，混匀后放置-20摄氏度，30min。

6.14000rpm，4℃，10min。

7.小心倒掉异丙醇(注意沉淀)，加入1ml 75%的乙醇，颠倒混匀，洗涤DNA。

8.14000rpm，离心5min，倒掉75%乙醇。

9.重复步骤8。

10.将DNA沉淀放置于超净台，15min，彻底去除多余的乙醇。

11.加入50-200ul的ddH2O，测浓度，跑电泳，鉴定DNA的质量。

12.置于-20℃，保存。

试剂配制

1.Buffer①(200ml)：D-山梨醇-12.754g，Tris pH8.-2 2.42g，EDTANa2-0.3722g。

2.Buffer②(200ml)：Tris(pH7.5))4.8456g，EDTANa2-3.722g，NaCl-23.492g，CTAB-4g。

3.Buffer③(200ml)：N-月桂酸肌氨酸钠盐-10g。

4.Na2HSO3。

DNA提取缓冲液配制

Buffer①--13.75ml + Buffer②--31.25 ml+ Buffer③--5ml+NaHSO3--0.19g = 50ml DNA提取缓冲液。