核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,是生命最基本的物质之一。核酸存在于所有动物细胞、植物细胞、微生物内、生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸的化学组成、核苷酸排列顺序都不同。核酸主要包括RNA(核糖核酸)和DNA(脱氧核糖核酸),其中DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。
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核酸提取的原则首先保证核酸一级结构的完整性,其次要排除其它分子的污染。
提取核酸时要注意简化步骤,缩短提取时间;减少化学因素对核酸的降解;减少物理因素对核酸的降解:机械剪切力和高温;防止核酸的生物降解。
核酸提取大致分为3大部分:破碎、提取、纯化
细胞裂解法
1.物理方式:煮沸法、玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法、匀浆法
2.化学方式:表面活性剂(SDS法)、碱裂解法
3.生物方式:酶法(溶菌酶、蛋白酶K等)
常见样本提取方法总结
浓盐法:利用RNA和DNA在盐溶液中溶解度不同,将二者分离
有机溶剂提取法:有机溶剂作为蛋白变性剂,同时抑制核酸酶的降解作用
高度梯度离心法:利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物
吸附材料结合法:①硅质材料 高盐低PH值结合核酸,低盐高PH值洗脱②阴离子交换树脂 低盐高PH值结合核酸,高盐低PH值洗脱③磁珠 磁珠微粒包裹上不同基因可吸附不同的