ctab提取dna流程图_CTAB法提取DNA简要步骤

1

，

取超低温保存的叶片样本，

研钵磨碎后加入

2.0ml

离心管中

(

加入的叶片粉末量没过

2.0ml

离心管的底部的尖端即可

)

。

2

，

迅速加入

65

℃预热过的

CTAB 800μl

(

2%CTAB

，

使用前加入

0.5-

1% β

-

巯基乙醇)

，

混合

均匀后放入

65

℃水浴一小时。每十分钟摇动一次，使

CTAB

与叶片样本充分混匀。

3

，

取出离心管至常温，

放置

2

分钟后加入

800

μ

l

氯仿

/

异戊醇

(

24:1

)

混合液，

将混合液与

CTAB

混匀后缓缓摇动

1-2

分钟，使

CTAB

与氯仿充分接触。

4

，

12000rpm

离心

5-10

分钟，小心吸取上清液至新的

2.0ml

离心管中，再次加入

700

μ

l

氯

仿

/

异戊醇混合液，缓缓混匀

1-2

分钟后，再次离心，吸取上清液至

1.5ml

离心管中。

5

，

迅速向

1.5ml

离心管中加入等体积的

-20

℃预冷过的异丙醇，混匀，

-20

℃放置

2

小时左

右。

6

，

将

-20

℃保存的离心管取出，

12000rpm

离心

5-10

分钟，弃去液体，

DNA

应沉淀在离心

管底部。

7

，

加入

1ml

70%

乙醇洗涤

DNA

沉淀(甩一下离心管让

DNA

沉淀飘起来就行)

，洗涤两

次。

8

，

将乙醇洗涤过的

DNA

风干(超净工作台吹一下或者真空浓缩仪)

。

9

，

风干后用

50-80

μ

l

ddH2O

溶解，待用。本步骤一定不要多加水，

SNP

需要较高浓度

DNA

。