ctab法提取dna流程图_CTAB法提取DNA

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试剂：

1)2×CTAB 提取液(PH 8.0)：2% CTAB，1.4MNacl，0.02MEDTA，0.1MTris-cl，0.2%巯基乙醇。即称取CTAB 2 g加蒸馏水40ml，加1M Tris-cl(PH8.0)10ml，0.5M EDTA(PH 8.0)4ml和5M NaCl 28ml,待CTAB溶解后用蒸馏水定容到100ml(提取前加入2%的巯基乙醇，100ml加0.2ml巯基乙醇)

2)1M Tris-cl(PH 8.0)100 ml:12.11g Tris碱；ddH2O ，80ml；HCl，4.9 ml三者混匀充分溶解后，滴加浓盐酸调PH至8.0，定容至100ml

3)0.5M EDTA(PH 8.0) 100ml：在80ml水中加入18.01g EDTANa2.2H2O搅拌溶解，用NaOH调PH至8.0(约2gNaOH颗粒)，定容至100ml

4)5M NaCl 100ml：称取29.22g NaCl，用ddH2O定容到100ml

5)3M NaAc10ml：称取2.46g NaAc，用ddH2O定容到10ml

操作步骤：

1、 称取1.0g幼嫩的叶片，在研钵中加入液氮预冷，将叶片放到液氮中研磨均匀，直至全部研磨至粉末，转入1.5ml离心管中，加入600 ul 65℃预热的CTAB溶液(用前加入2%的巯基乙醇)

2、 将装有CTAB和样品的EP管放入65℃水浴，约1h

3、 冷却后，加入600ul 的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1=300:288:12)，混匀，12000rpm，离心15min

4、 吸上清，装入一新的EP管

5、 加入600ul 氯仿：异戊醇(24:1=576:24)，12000rpm。离心15min

6、 吸上清，转入一新的离心管中，加入1/3体积的NaAc(3mol/l)

7、 加入1ml-20℃预冷的无水乙醇，混匀后置于-20℃(-80℃，30min)3-4h

8、 12000rpm，10min弃上清

9、向离心管中加入75%的乙醇洗涤2-3次，置于吸水纸上倒置晾干

10、加入ddH2O(10-20ul)溶解

**：Tirs碱、浓盐酸、EDTANa2.2H2O、NaOH、NaCl、CTAB、酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、NaAc、液氮、巯基乙醇

研钵、恒温水浴、离心机、离心管