为满足谷子高通量分子标记检测的需要,探究在不使用液氮研磨情况下,无需经过发芽,改进CTAB方法,直接从干种子中提取DNA。
结果显示,采用新方法对谷子种子提取的DNA经过分光光度计以及琼脂糖电泳检测得出,A260280。值在1.88—1.92,质量浓度在1662.85~2551.89ng/μL;并以此为模板进行SSR—PCR扩增,结果显示,所得条带清晰、多态性丰富。
该方法提取的谷子种子DNA质量稳定,能够满足分子标记检测的要求,同时简化了操作流程,实现了谷子种子DNA的高通量快速提取,为谷子高通量分子标记检测奠定了基础。
DNA作为分子试验的基础,其质量的好坏决定着试验的成功与否。
随着SSR,SNP和基因测序等高通量生物技术的发展,农作物研究需要检测的样本量显著增加,所以,能够在短时间内快速地提取大量高质量样本的DNA,是提高分子试验效率的有效手段。
当前,谷子DNA提取的主要方法包括SDS(十二烷基磺酸钠)法、CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)法和高盐提取法等。但这几种提取方法均以植物幼叶为材料,需经过3~7d的发芽期,需要进行液氮研磨,水浴、异丙醇沉淀耗时较长,批量核酸提取工作量繁重,本试验旨在探究直接以谷子种子为材料提取DNA的方法,简化操作流程,缩短提取周期,为谷子高通量分子检测奠定基础。
材料和方法
1.1 材料