ctab法提取dna流程图_CTAB法提取总DNA

CTAB

法提取槐树总

DNA

⑴

分别精称

1.0g

槐树新鲜叶片，去主脉，放入研钵。

⑵

用液氮将叶片组织研磨成细粉，然后将粉末分装于

2mL

离心管中。

⑶

各离心管中加入

6

5

℃预热的

2

×

CTAB

抽提液

1000

µ

l

和

β

-

巯基乙醇

4

µ

l

，

混和使之充分湿润，于

6

5

℃水浴锅中温育

1.5h

，不时混匀。

⑷

12000

rpm

离心

10

min

，将上清液转移至新的离心管中，弃沉淀。

⑸

上清液中加入等体积的酚

:

氯仿

:

异戊醇(

25

：

24

：

1

)

(

v/v

)

，抽提上清，颠倒

混匀

7min

，

12000

rmp

离心

10

min

。

⑹

将离心后所得的上清液体转移至新离心管；每管加入等体积的氯仿

/

异戊醇

(

24

：

1

)

(

v/v

)

，再次抽提上清液，

12

000

rpm

离心

10

min

，上层液体转移至

新管。

⑺

每管加入

1/10

体积的

3

mol

/

LNaAc

(pH

8.0)

和等体积的异丙醇，轻轻翻转混

匀，置

-20

℃冰箱中冰浴

30

min~1h

，沉淀

DNA

。

⑻

12000

rpm

离心

10

min

，弃上清。

⑼

用

70

％酒精和无水乙醇各洗涤沉淀一次，分别离心

2min

自然干燥。

⑽

加

50µ

l

TE

缓冲液溶解

DNA

；保存于

-20

℃的冰箱中备用。

⑾

DNA

浓度及质量检测：

取

3

μ

L

DNA

提取液，用

1%

琼脂糖凝胶电泳检测

DNA

浓度、质量。