CTAB
法提取槐树总
DNA
⑴
分别精称
1.0g
槐树新鲜叶片,去主脉,放入研钵。
⑵
用液氮将叶片组织研磨成细粉,然后将粉末分装于
2mL
离心管中。
⑶
各离心管中加入
6
5
℃预热的
2
×
CTAB
抽提液
1000
µ
l
和
β
-
巯基乙醇
4
µ
l
,
混和使之充分湿润,于
6
5
℃水浴锅中温育
1.5h
,不时混匀。
⑷
12000
rpm
离心
10
min
,将上清液转移至新的离心管中,弃沉淀。
⑸
上清液中加入等体积的酚
:
氯仿
:
异戊醇(
25
:
24
:
1
)
(
v/v
)
,抽提上清,颠倒
混匀
7min
,
12000
rmp
离心
10
min
。
⑹
将离心后所得的上清液体转移至新离心管;每管加入等体积的氯仿
/
异戊醇
(
24
:
1
)
(
v/v
)
,再次抽提上清液,
12
000
rpm
离心
10
min
,上层液体转移至
新管。
⑺
每管加入
1/10
体积的
3
mol
/
LNaAc
(pH
8.0)
和等体积的异丙醇,轻轻翻转混
匀,置
-20
℃冰箱中冰浴
30
min~1h
,沉淀
DNA
。
⑻
12000
rpm
离心
10
min
,弃上清。
⑼
用
70
%酒精和无水乙醇各洗涤沉淀一次,分别离心
2min
自然干燥。
⑽
加
50µ
l
TE
缓冲液溶解
DNA
;保存于
-20
℃的冰箱中备用。
⑾
DNA
浓度及质量检测:
取
3
μ
L
DNA
提取液,用
1%
琼脂糖凝胶电泳检测
DNA
浓度、质量。