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在最初的环状RNA研究中,认为环状RNA都是由exon通过反向剪切构成的,称之为exonic circRNA,只有这样的环状RNA能够由PCR反应验证出来的。
CIRI是一款环状RNA检测软件,通过该软件的预测结果,学者第一次用实验验证出了intronic circRNA和intergenic circRNA。该软件操作简便,准确度高,是非常流行的一款环状RNA检测软件。
该软件至少需要两个输入文件,基因组的fasta序列和测序数据比对产生的sam文件,需要注意的是,输入的sam文件必须是由bwa-mem算法比对产生的 。分析的pipeline示意如下
对于输入的sam文件,需要经过两次扫描,在第一次扫描时,根据双端数据的比对情况筛选候选的环状RNA,这一步通过判断SAM文件中CIGAR那一列的值来实现,本质上是检测覆盖环状RNA连接点处的junction reads,根据测序读长和连接点处包含的基因组区域的特征,分成以下3种模型