辣椒疫霉RXLR效应子抑制植物免疫

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研究揭示了辣椒疫霉病原体RXLR25如何通过抑制植物受体细胞质激酶亚家族RLCK-VII的磷酸化，从而阻碍植物对疫霉和细菌的免疫响应。RXLR25与RLCK-VII蛋白相互作用，特别是RLCK-VII-6和RLCK-VII-8成员，导致模式诱导的免疫反应减弱，增强植物对疫霉病原菌的敏感性。这项工作加深了对植物与卵菌病原体相互作用的理解，并强调了RLCK-VII蛋白在植物抗病性中的关键作用。

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文章信息

题目：A Phytophthora capsici RXLR effector targets and inhibits the central immune kinases to suppress plant immunity

刊名：New Phytologist

作者：Xiangxiu Liang，Daolong Dou et al.

单位：China Agricultural University

日期：22 June 2021‍

摘要

受体细胞质激酶亚家族 VII (RLCK-VII) 蛋白是植物模式识别受体 (PRR) 复合物中的中枢免疫激酶，它们协调一系列针对细菌和真菌病原体的复杂防御反应。然而，RLCK-VII 在植物-卵菌病原体相互作用中的作用尚未确定。辣椒疫霉是一种臭名昭著的卵菌病原体，会感染许多重要的农业蔬菜。

在这里，我们报告了 RXLR25 的鉴定，这是P的毒力所需的 RXLR 效应器。辣椒。RXLR25在植物中的表达显着增强了植物对疫霉病原菌的易感性。RXLR25 严重损害了拟南芥中微生物模式诱导的免疫激活。我们进一步表明 RXLR25 与 RLCK-VII 蛋白相互作用。

使用 9 个rlck-vii高阶突变体，我们观察到 RLCK-VII-6 和 RLCK-VII-8 成员是抗辣椒疫霉所必需的。RLCK-VII-6 成员是疫霉培养滤液 (CF) 诱导的免疫反应所必需的。RXLR25 直接靶向 RLCK-VII 蛋白，如 BIK1、PBL8 和 PBL17，并抑制模式诱导的 RLCK-VII 磷酸化以抑制下游免疫反应。

本研究确定了辣椒假单胞菌的一个关键毒力因子，结果揭示了 RLCK-VII 蛋白在植物-卵菌相互作用中的重要性。

技术路线

研究中使用的本氏烟草、拟南芥和辣椒 ( Capsicum annuum L.) 植物在 23°C 和 70% 相对湿度的土壤中，在 10 小时：14 小时、光照：黑暗的循环中进行栽培

将RXLR25编码序列克隆到 pCAMBIA1300-35S-HA-RBS 载体中

农杆菌介导的转化引入 Col-0 植物

疫霉菌感染试验

细菌感染测定

为了沉默辣椒红辣椒中的 RXLR25 ，将来自RXLR25的特定序列（545-1278 bp）扩增并克隆到 pTOR 载体中，并通过聚乙二醇（PEG）介导的原生质体转化引入辣椒辣椒 LT263

氧化爆发测量

RXLR25 相互作用蛋白的质谱分析

免疫共沉淀 (co-IP) 测定

谷胱甘肽-S-转移酶 (GST) pull down

萤光素酶互补测定

主要结果

3.1 RXLR25 增强植物对疫霉病原菌的敏感性

Phytophthora病原体部署 RXLR 和 CRN 效应器作为武器来抑制宿主免疫并帮助它们在植物中增殖。为了识别可能干扰宿主免疫系统的辣椒辣椒效应子，我们根据辣椒基因组序列克隆了许多 RXLR 和 CRN 效应子。FRK1是检测植物免疫激活的常用标记基因。因此，我们进行了基于原生质体的报告基因分析，以检查效应子的表达是否可以抑制 flg22 诱导的FRK1启动子-萤火虫荧光素酶 (FRK1::LUC) 活性。

在这些效应子中，RXLR25 显着抑制 flg22 诱导的 FRK1::LUC 活性，而 RXLR2、RXLR5、RXLR11、RXLR14 和RXLR32不能（图 S1a ）。PsCRN63 被用作阳性对照，因为据报道它可以抑制 flg22 诱导的 FRK1::LUC 活性。生物信息学分析显示 RXLR25 在大豆假单胞菌、致病疫霉和拟南芥透明孢子菌物种中不保守，表明 RXLR25 可能对辣椒假单胞菌具有特异性（图S1b ）。

为了检查 RXLR25 是否可以促进疫霉感染，我们使用农杆菌介导的瞬时表达和接种P. capsici菌株 LT263 或P. infestans TDT-88069在本氏烟草中瞬时表达空载体 (EV) 对照和 RXLR25-HA 。与 EV 对照相比，表达 RXLR25-HA 的一半叶片比表达 EV 的一半叶片表现出更大的病变区域（图 1a），表明 RXLR25 可以促进P. capsici在本氏烟草中的感染。同样，RXLR25-HA 也极大地促进了致病疫霉菌株 TDT-88069 定殖（图 1b）。免疫印迹分析显示 RXLR25-HA 通常在本氏烟草中表达（图 1a，b）。然后我们通过农杆菌介导的稳定转化将RXLR25-HA引入拟南芥，获得了两个独立的转基因株系RXLR25-HA-L1和RXLR25-HA-L2。免疫印迹分析显示 RXLR25-HA 在 T3 代中以相似水平在两个转基因系中表达（图 S2a ）。与EV转基因和 Col-0 植物相比，这两个转基因系没有显示出明显的形态差异࿰